C型凝集素相关蛋白OCILRP2调控TLR4信号促进DC成熟的分子机制

Toll-like receptors (TLR) activation is critical in promoting dendritic cells (DC) maturation and activation. Our previous study found that blockage of Osteoclast Inhibitory Lectin-related Protein 2 (OCILRP2) signaling suppressed LPS-induced DC maturation in vitro, but not TNFα-induced DC maturation. It suggests that OCILRP2 maybe a novel regulator works in coordination with TLR4 signaling in DC maturation and activation. In order to exploring the molecular mechanism underlying OCILRP2-mediated regulation of TLR signal. OCILRP2 siRNA-expressing bone marrow chimeric mice will be generated, and the maturation status of OCILRP2-silenced DC will be assessed to confirm the regulation between TLR4 signal and OCILRP2. Then, we hope to disclose how OCILRP2 regulates TLR4 signaling in DC maturation and activation by making clear the OCILRP2 signal pathway, and measuring the critical signal transducers and transcription factors activation of TLR4 signal pathway in OCILRP-silenced DC. This research is helpful for understanding DC development and differentiation. It is also useful for developing DC vaccines in clinical application.

Toll样受体激活是促进DC成熟与活化的重要途径。我们前期研究发现，体外阻断破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2（OCILRP2）受体信号抑制了LPS诱导的DC成熟，而对TNFα诱导的DC成熟没有影响，提示OCILRP2是一个新的调节分子，协同TLR4信号促进DC成熟。为探讨OCILRP2调节TLR4信号通路的分子机制，本项目将应用siRNA技术结合骨髓移植建立OCILRP2沉默小鼠，通过分析小鼠体内DC的成熟状态、OCILRP2沉默DC对LPS及TNFα刺激的反应，确证OCILRP2对TLR4信号的协同作用；并通过分析OCILRP2向胞内传递信号的分子通路、OCILRP2沉默对TLR4信号通路中关键分子和转录因子活性的影响，揭示OCILRP2在DC成熟与活化过程中调控TLR4信号的分子机制。该研究的完成不仅有助于对DC成熟与活化过程的认识，而且对制备DC疫苗应用于疾病治疗具有指导意义。

Toll样受体4（Toll-Like Receptor 4，TLR4）作为天然免疫细胞重要的模式识别受体，在促进巨噬细胞活化和发挥免疫效应功能中具有重要作用。C 型凝集素相关（clr）蛋白家族中的破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2(Osteoclast inhibitory lectin related protein 2，OCILRP2)是一种Ⅱ型跨膜蛋白受体，可表达于淋巴细胞、巨噬细胞和树突状细胞等多种免疫细胞。研究表明，体外阻断OCILRP2受体信号可抑制淋巴细胞和树突状细胞的活化。但是，OCILRP2受体信号对巨噬细胞功能的影响目前还鲜有报道。本课题通过沉默OCILRP2基因在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达，探讨OCILRP2调节Toll样受体4（Toll-Like Receptor 4，TLR4）信号通路对巨噬细胞功能的影响。.本课题的研究结果表明，沉默OCILRP2基因的RAW264.7细胞伪足数量和细胞黏附能力均显著低于对照组细胞（P<0.05）；沉默组细胞的划痕愈合能力和迁移、趋化能力也明显低于对照组细胞（P<0.05）。对细胞内吞能力的检测结果表明，和对照组细胞相比，沉默OCILRP2的RAW264.7细胞其吞饮和吞噬能力均显著减弱（P<0.05）。ELISA和RT-qPCR实验结果表明，沉默组细胞合成分泌细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平显著低于对照组细胞，而且，沉默OCILRP2抑制RAW264.7细胞iNOS的表达水平和分泌NO。进一步的分子机制研究表明，沉默OCILRP2抑制转录因子NF-κB的活化和向细胞核内转移，TLR4信号通路中MyD88非依赖途径相关信号分子的表达和活化水平被显著抑制。综合以上结果，我们认为OCILRP2通过MyD88非依赖途径调节TLR4信号通路，进而影响巨噬细胞的活化与功能。