hprt基因座作为转基因定位整合位点的研究

为消除转基因实验中位置效应的影响，研究了两种转基因高保真表达策略。第一种是定位整合到看家基因hprt位点的策略，构建了两个同源重组载体，分别用EF1α-nls-lacZ报告基因和CGA基因启动子CGA反义cDNA为目的基因，以便分别考察组成型启动子、增强子和组织特异性启动子在hprt基因座中驱动基因表达的情况。在细胞转化实验中确定了HAT和6TG选择药物的工作剂量。另外创新性地提出用PCR扩增法获得基因组同源区片段，构建更高效的同源重组载体，并使用更易检测的EGFP作为报告基因。根据国际研究新进展确定了第二种高保真表达策略，即在目的基因两侧加入绝缘子元件，成功构建了绝缘载体pLNKS-14。