鼻咽癌放疗抵抗性相关的分子分型研究

Molecular prediction of radioresistance before nasopharyngeal carcinoma (NPC) therapy is a difficult and hot study spot.Based on our previous studies, this project will focus on the molecular classification of NPC related with radioresistance with the techniques of proteomics and quantum dots (QDs) platform. First, 3-5 molecular biomarkers related with radiation resistance will be identified after comfirmed with tissue array,IHC, western blot, RT-PCR et al. Then, the retrospective study with large samples will be continued using the QDs platform.The 2-3 molecular indexes and their values for early predicting NPC radioresistance will be comfirmed finally, after statistically analysing the sub-cellular expression values of each biomarkers in NPC cells got from QDs software and compared with the prognosis information.The preliminary standard of NPC molecular classification related with radioresistance will be established. This study will offer a new standard of molecular classifcation related with radioresistance for NPC probably，and can provide powerful proof for individualization treatment.

鼻咽癌放疗抵抗性治疗前的分子预测一直是研究难点和热点。本项目将在前期工作基础上，运用量子点纳米技术，拟初步建立鼻咽癌放疗抵抗相关的分子分型标准。首先，结合前期结果，运用组织芯片等验证并初步确定3-5个与放疗抵抗相关分子标志物；然后应用量子点纳米技术及其特制分析软件获得各分子标志物在鼻咽癌细胞及其亚结构（细胞膜、细胞浆和细胞核）的表达量值，结合预后资料统计和信息处理，进行大样本回顾性研究，获得2-3个早期预测鼻咽癌放疗抵抗性的分子指标及其表达量值，据此对鼻咽癌按照放疗抵抗性不同进行初步分子分型。本研究将可为鼻咽癌提供一种放疗抵抗性相关的分子分型方法，为其个体化治疗提供研究依据。

基于前期的基础研究工作，首先，我们选定Maspin、GRP78、Mn-SOD、FADD、IRS-1和HIF-1α为鼻咽癌放疗抵抗相关候选标志物，再应用自制的含448点的鼻咽癌组织芯片、结合免疫组化技术进一步验证它们和鼻咽癌放疗抵抗的相关性，结果发现：鼻咽癌放疗抵抗组Maspin表达显著下调，GRP78、Mn-SOD和HIF-1α表达显著上调，它们的总表达量（WI）在鼻咽癌放疗敏感组(RS)和放疗抵抗组(RR)比较有统计学差异，和鼻咽癌的放疗抵抗性可能相关；而IRS-1和FADD的WI在两组中对比没有统计学差异；同时GRP78、FADD和HIF-1α者的核表达率（RNC）在两组间比较有统计学差异，表明它们亚细胞位置的变化可能和鼻咽癌发生放疗抵抗相关，可进一步作为鼻咽癌放疗抵抗相关的候选分子指标。. 然后，自我科头颈肿瘤组织标本库内选取了放疗敏感(RS)者60例、放疗抵抗者(RR)者40例共100例鼻咽癌标本，利用量子点纳米技术平台（包括量子点纳米免疫荧光染色、CRi Nuance“机器学习识别”及单细胞亚结构量子点荧光信号定量分析技术），获取GRP78、Mn-SOD、FADD、和HIF-1α各自在每个病例的总表达量值（T-a.u.）、浆表达量值（C-a.u.）和核表达量值（N-a.u.）。结果发现：GRP78、Mn-SOD和HIF-1α的总表达量值(T-a.u.) RR组和RS组间比较有统计学差异，GRP78和FADD的N-a.u.在放疗抵抗组上调、而HIF-1α的N-a.u.下调，两组间比较有统计学差异。为此我们选取Mn-SOD的T-a.u.、GRP78的N-a.u.和HIF-1α的N-a.u.作为预测鼻咽癌是否发生放疗抵抗的分子指标，根据预设的界定值（cut-off value）标准，随机抽取其中10例鼻咽癌放疗抵抗患者按照最佳诊断收益方式等进行诊断试验评价分析，结果发现我们发现Mn-SOD的T-a.u.和HIF-1α的N-a.u.联合诊断其阳性预测率最高。. 同时，我们还进行了鼻咽癌放疗抵抗分子机制的部分研究，在建立了鼻咽癌放疗抵抗相关miRNA差异表达谱后，我们深入研究发现其中的miR-185-3p可能通过WNT2B/b-catenin通路调节鼻咽癌的放疗抵抗性。. 本研究将可为实现早期精确预测鼻咽癌放疗抵抗性、为其分子分型和治疗方案