乳脂球表皮生长因子8对血管内皮细胞的保护效应及其机制研究

Atherosclerosis (AS) is considered as a complex disorder of chronic inflammation. Anti-inflammation therapeutic strategy has received much attention in the field of prevention and treatment in AS. Milk fat globule-epidermal growth factor 8(MFG-E8) is a novel anti-inflammation factor, which plays important roles in anti- inflammation, improving the clearance of apoptotic cell and enhancing blood vessel integrity. However, the role of MFG-E8 in atherosclerosis is largely unknown. In the present research, firstly, we will investigate the serum MFG-E8 concentrations in patients with or without different stages of CHD, examine the associations among MFG-E8, CHD clinical classification and the severity of coronary artery stenosis. Secondly, in Human Umbilical Vein Endothelial Cells, using lentivirus and crispr-cas9 technology, we will study the inhibiting effect of MFG-E8 on endothelial cell dysfunction and apoptosis after inducing by IL-6 and find out the probable molecular mechanism. Thirdly, in ApoE knock-out mice, we will further discuss the influence of MFG-E8 on the progression of AS and validate its mechanism on the effect of anti-atherosclerosis. Through this research, we want to supply a solid theoretical basis for the role of MFG-E8 in AS and also provide a new strategy for the prevention and treatment in AS.

动脉粥样硬化（AS）是多因素导致的慢性炎症反应性疾病。对AS行抗炎治疗是当今AS防治研究的热点。乳脂球表皮生长因子8（MFG-8）是新近发现的抗炎因子，其在抗炎、增强凋亡细胞清除和促进血管生成等方面具有重要的生物学功能。然而，其在动脉粥样硬化中的作用尚不明确。本研究拟在血清学水平，分析血清MFG-E8与冠心病临床分型及狭窄程度的关系，并深入探讨血清MFG-E8与心血管风险因子的相关性；在原代HUVECs细胞水平，通过慢病毒转染高表达MFG-E8和利用crispr-cas9技术构建MFG-E8 knock-out细胞系，探讨MFG-E8对IL-6诱导内皮细胞损伤及凋亡的抑制效应及其可能分子机制；在ApoE基因敲除小鼠上，深入探讨MFG-E8对AS发生发展的影响并验证其抗动脉粥样硬化的作用机制，为MFG-E8在动脉粥样硬化防治中的作用提供坚实的理论基础，为动脉粥样硬化的防治提供新思路和新策略。

动脉粥样硬化（AS）是日益突出的公共健康问题。对AS行抗炎治疗是当今AS防治研究的热点。乳脂球表皮生长因子8（MFG-8）是新近发现的抗炎因子，其在抗炎、增强凋亡细胞清除和促进血管生成等方面具有重要的生物学功能。我们选取经冠脉造影确诊为冠心病的患者295名和对照人群176名，检测受试对象血清中的 MFG-E8 水平及心血管风险因子（炎性因子超敏-CRP 以及血脂），分析血清 MFG-E8 与冠心病临床分型及狭窄程度的关系，明确血MFG-E8 与狭窄程度Gensini评分成显著负相关，与心血管风险因子hs-CRP成负相关，与不良的血脂组合成负相关。同时构建高表达和低表达MFG-E8的HUVECs，通过IL-6诱导，检测细胞培养上清内皮细胞损伤标志因子一氧化氮（ NO）水平；蛋白免疫印迹技术（WB）检测各组细胞凋亡相关蛋白 BCL-2、 Bax、 caspase3、 PARP的表达，检测炎症相关指标ICAM-1、 VCAM-1、水平；ELISA技术检测细胞培养上清MCP1水平。发现MFG-E8显著抑制IL-6诱导的内皮细胞炎症反应与凋亡，随后我们进行了相关炎症信号通路JAK/STAT3、NF-κB的表达情况，证实MFG-E8抑制IL-6诱导的内皮细胞炎症反应与凋亡是通过STAT3/NFκB信号通路发挥生物学效应。最后我们利用ApoE基因敲除小鼠构建AS模型，外源性给予低剂量和高剂量鼠重组MFG-E8，取上述各组小鼠的主动脉瓣膜，通过油红O染色，比较各组脂质积累的程度。并检测了小鼠血清中炎性因子和血脂水平。实验发现MFG-E8可显著延缓AS进程、抑制主动脉环炎性因子MCP-1与IL-6的表达、降低血清hs-CRP、升高NO水平。本项目研究成果为MFG-E8在动脉粥样硬化作用提供坚实的理论基础，为动脉粥样硬化的防治提供新思路和新策略。