非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药相关血浆microRNA鉴定及机制探索

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）为代表的分子靶向治疗已经成为晚期非小细胞肺癌不可或缺的治疗方法。多项国际研究以及本课题组前期工作已证实EGFR敏感性突变在筛选EGFR-TKIs优势人群中具有举足轻重的地位；尤其在一线治疗中的地位更加明确；但约20%-40%携带EGFR敏感性突变的NSCLC患者TKIs治疗无效，提示有其他耐药机制参与。近年来，miRNA与肿瘤耐药研究领域取得较大进展，miRNA与EGFR信号通路上关键分子的关系始见报道，与吉非替尼等靶向治疗耐药的相关性也逐渐浮出水面。本研究旨在针对EGFR-TKIs分子标志的前期工作基础上，通过回顾性研究，在外周血中探索miRNA与TKIs耐药的相关性，从而推动EGFR-TKIs个体化治疗的进一步发展。同时明确miRNA导致TKIs耐药的基础机制，为以miRNA为靶解决耐药提供前期理论基础。

项目按照基金标书四项要点基本完成。最后一部分内容“miRNA靶基因生物学实验验证及功能预测”正在进行中。.研究成果一：.明确三种miRNA：miR-21、miR-27a和miR-218可能介导EGFR突变患者对EGFR-TKI的耐药。.本课题采用的Taqman低密度芯片是基于RT-PCR原理的高通量筛选技术，它具有高特异性：可以区分前体和成熟miRNA；精确度高，动态范围宽，不同拷贝都能检测；高灵敏度：能够检测到1-10ng/μL的样本。课题应用Taqman低密度芯片技术检测EGFR突变的晚期非小细胞肺癌患者中不同EGFR-TKI疗效组之间血浆miRNA的表达水平（训练组 training），筛选出153种差异miRNA。生物信息学分析得到可能影响EGFR疗效的12种差异miRNA，通过测试组（testing）确定差异表达的3种miRNA：miR-21、miR-27a和miR-218耐药组；随后在验证组（validation）中得到进一步证实。同时，在EGFR野生型患者中并未发现此3种差异表达的miRNA与疗效之间的明确关系。表明3种miRNA可能介导EGFR突变患者对EGFR-TKI的耐药，作为EGFR突变检测的补充，为EGFR-TKIs治疗提供新的分子生物学标志。摘要收录入2013年ASCO大会论文集。文章已投出。.研究成果二： .部分经费支助研究“化疗对费小细胞肺癌EGFR通路相关基因变异的影响”。与本基金的研究目的相近，围绕靶向治疗敏感耐药基因相关内容展开。通过研究新辅助化疗前后组织中EGFR通路相关基因（EGFR敏感突变，KRAS突变，c-MET扩增，T790M突变）的变异，结果发现新辅助化疗可降低EGFR突变和下游基因变异的发生率，提示实时定量检测EGFR通路基因变异的重要性。文章已发表：PLoS One 2013, 8(3)。.研究成果三：.部分经费支助研究“胸水中EGFR突变对EGFR-TKI疗效的指导作用”。与本基金的研究目的相近，围绕靶向治疗敏感耐药基因相关内容展开。结果发现，胸水与组织检测EGFR突变的一致性高，胸水中检测EGFR突变可以预测EGFR-TKI的疗效，指导NSCLC患者的靶向治疗。文章已完成，拟投2015年IASLC大会摘要。