调更汤对围绝经期下丘脑神经保护的细胞内信号传导机制研究

Tiao Geng Tang is an effective formula for menopausal syndrome via nourishing and harmonizing liver and kidney and balancing yin and yang. Previous clinical studies have shown that Tiao Geng Tang can release menopausal symptoms such as hot flashes, sweating and mood disorders. Animal experiments have indicated that Tiao Geng Tang up-regulated estrogen receptors ERα、β expression although it cannot increase hypothalamic E2 level. Meanwhile Tiao Geng Tang ameliorated oxidative damage of mitochondria of hypothalamus to postpone the aging of the nerve tissue. Thus Tiao Geng Tang has showed a neuroprotective effect for hypothalamus nerve cells. Mitogen-activated protein kinase (MAPK) cascade pathway mediated by ERα, β has been verified that the it plays an important role in neuroprotection via regulating neurotrophy and neuronal anti-apoptosis. The study employs castrated 10 months old rats to mimic menopausal animal model, focuses on hypothalamus which is the important organ closely related to the pathogenesis of menopausal symptoms, observes morphous of hypothalamic nerve cells and neuronal synaptic density, validates neurotrophic and anti-apoptotic neuroprotective effects of Tiao Geng Tang, and looks for the pathways and targets in three main branches of ERα,β mediated MAPK cascade including ERK pathway, JNK pathway and p38 MAPK pathway. Accordingly, the study tries to explore the intracellular signal transduction mechanisms of Tiao Geng Tang treating menopausal syndrome, also to provide a new idea for understanding the prevention and treatment of Traditional Chinese Medicine for menopausal syndrome.

调更汤调补肝肾，平衡阴阳，是治疗围绝经期综合征的有效验方。既往临床研究显示调更汤能有效缓解烘热汗出、情绪异常等症状；动物实验表明调更汤虽然不能提高下丘脑E2水平，但能在低雌激素环境下升调节下丘脑雌激素受体ERα、β表达，有效改善下丘脑氧化损伤，延缓下丘脑神经组织衰老，显示调更汤存在下丘脑神经保护作用。ERα、β介导丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK )级联通路通过调节神经营养和神经细胞凋亡，在神经保护方面起重要作用。本课题以去势大鼠为围绝经期动物模型，以下丘脑为研究对象，以下丘脑神经细胞形态和神经元细胞突触密度为疗效指标，立足于 ERα、β介导的MAPK 级联三条主要分支ERK通路、JNK通路、p38 MAPK通路，通过电镜、免疫组化、RT-PCR等技术，从神经营养和抗凋亡两方面研究调更汤的下丘脑神经保护途径和靶点，探讨调更汤治疗围绝经期综合征的作用机制，为中医药防治围绝经期综合征提供新思路。

前期实验证实调补肝肾、平衡阴阳的调更汤具有调节衰老大鼠下丘脑雌激素受体ERα或ERβ和改善下丘脑组织衰老的作用，本项目旨在深入探讨调更汤下丘脑神经保护作用调控机制。.本项目电镜检测发现调更汤改善去势5月龄和去势10月龄雌性SD大鼠下丘脑神经元细胞、细胞器（线粒体、内质网）形态，减少脂褐素沉积，证实调更汤具有保护下丘脑神经元细胞的作用。.进一步研究发现，调更汤升调节去势大鼠Raf-ERK1/2-CREB信号通路并改善下丘脑组织脑源性神经营养因子（BDNF）、神经生长因子（NGF）基因和蛋白表达，提示调更汤具有改善下丘脑神经组织营养作用；还能抑制去势大鼠下丘脑神经组织凋亡，这种抗凋亡作用一方面通过JNK通路核途径，即激活JNK促进下游促凋亡基因p53与Bax的表达；另一方面通过JNK通路线粒体途径，即抑制线粒体膜上的Bcl-2表达和casepase-9/caspase-3信号而实现。据此，本项目组认为，调更汤的下丘脑神经保护作用不仅与改善去势大鼠下丘脑组织ERK1/2信号通路介导的神经营养作用有关，而且还与调更汤抑制JNK核/线粒体信号通路介导的抗神经元细胞凋亡作用有关。.免疫组化双标记技术检测ERα、ERβ与ERK1/2、JNK、p38通路调节相关性方面，本项目组没有得到预期假设结果，课题组推测ERα、ERβ主要还是起到核受体作用，调更汤对MAPK级联的调控可能与雌激素膜受体相关而非核受体，这个假设在后续课题的细胞实验中正在进一步研究。.本项目结合以往抗衰老方面结果，提示调更汤对机体具有抗衰老作用，本项目组正在考虑扩大调更汤适应症范围，面向卵巢储备功能下降和卵巢低反应患者，为更多的女性患者带来健康的福音。.本项目组在在动物实验基础上，还超计划开展了临床、文献和药物组分研究，完善了调补肝肾法及其代表方“调更汤”治疗围绝经期综合征的理论体系和临床依据，为进一步深入机制研究奠定基础。