过山枫抗类风湿关节炎的物质基础研究

Celastrus aculeatus Merr.is a Chinese medicine that belongs to the family Celastraceae and the genus Celastrus. For centuries, roots, stems and leaves of C. aculeatus Merr.have been used to treat rheumatoid arthritis...Anti-inflammatory effects were found in Chloroform,petroleum ether and ethyl acetate extract fractions from C. aculeatus Merr. through the active site of screening in vitro. Using high-speed counter-current chromatography (HSCCC) technique, two high-purity monomer compounds were isolated and purified from petroleum ether extract fraction on the first time. They were pristimerin and nimbidiol,respectively.Pristimerin has obvious anti-inflammatory effect, and nimbidiol was another anti-inflammatory active ingredient that had been confirmed by the transgenic zebrafish model activity test...This project aims at screening anti-rheumatoid arthritis active site from Celastrus aculeatus Merr. through experimental arthritis rats model induced by Mtb.Using Ultra performance liquid chromatography (UPLC) and HSCCC separation technique, the effective parts of anti- rheumatoid arthritis from C. aculeatus Merr.were separated comprehensively under the guidance of MTT method about the screening experiment of mouse splenic lymphocytes culture in vitro. The chemical structures of the relative monomer compounds were identified with spectroscopy methods.And the active ingredients of anti-rheumatoid arthritis from C. aculeatus Merr.were determined with experimental arthritis rats model induced by Mtb,zebrafish angiogenesis inhibition test and so on.Susequently,the active ingredients of anti-rheumatoid arthritis from.C.aculeatus Merr.were produced by molecular imprinting technique...It is the solid foundaion to C. aculeatus Merr.being developed to anti-rheumatoid arthritis traditional Chinese herbs in the future

过山枫为卫矛科南蛇藤属植物，是我国民间久用的治疗类风湿关节炎的草药。.本课题组通过体外实验对过山枫抗炎作用的活性部位进行了初筛，发现过山枫石油醚部位、氯仿部位及乙酸乙酯部位均具不同程度的抗炎作用。应用高速逆流色谱对过山枫石油醚部位进行纯化分离，首次获得2个高纯度单体化合物，分别是具有明显抗炎作用的扁蒴藤素以及nimbidiol。经过转基因斑马鱼模型活性测试，证实nimbidiol是过山枫另一抗炎活性成分。.本项目拟通过Mtb诱导实验性关节炎大鼠模型准确筛选出过山枫抗类风湿关节炎的有效部位。并采用UPLC与HSCCC等技术，在体外活性指导下，对该有效部位进行系统性化学分离，表征所获单体化合物结构，以相关活性实验确证过山枫抗类风湿关节炎的有效成分。并以分子印迹技术制备过山枫抗类风湿关节炎的有效成分。.本研究能为未来将过山枫开发成抗类风湿关节炎的新中药制剂奠定物质基础。

类风湿关节炎是一种以慢性进行性关节炎病变为主的自身免疫性疾病，其发病机制不甚明了，目前临床治疗类风湿关节炎尚无根治性药物可用。本项目选取我国民间久用于治疗类风湿性关节炎的植物药过山枫为研究对象，采用活性追踪法研究过山枫中抗类风湿性关节炎的物质基础。.课题组首先通过过山枫石油醚、氯仿及乙酸乙酯萃取部位对体外小鼠脾淋巴细胞增殖的抑制作用实验对过山枫抗炎活性部位进行筛选，经生物统计学方法分析证实过山枫石油醚部位、氯仿部位及乙酸乙酯部位分别表现出不同程度的抗类风湿关节炎作用，尤以过山枫乙酸乙酯部位及过山枫石油醚部位的抗炎活性作用较强。.接着应用反复硅胶柱、高速逆流色谱及重结晶等分离技术对过山枫乙酸乙酯部位与过山枫石油醚部位的化学成分进行系统分离纯化，共得到9个单体化合物。经多种波谱学方法表征其化学结构，证实这9个单体化合物分别是扁蒴藤醇（暂命名）、4-羟基苯甲酸、4-羟基-3-甲氧基苯甲酸、3, 5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸、卫矛醇、β-谷甾醇、正三十三烷、nimbidiol及扁蒴藤素。其中，扁蒴藤醇经高分辨率质谱、一维核磁共振谱（1H, 13C NMR, DEPT）和二维核磁共振谱（HMBC）分析鉴定，证明是过山枫中所含新颖结构之化学成分。而4-羟基苯甲酸、4-羟基-3-甲氧基苯甲酸与3, 5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸三种化合物则为首次自过山枫中分离得到的酚酸类化学成分。.然后，课题组采用MTT法，初步考察了扁蒴藤醇、4-羟基苯甲酸、4-羟基-3-甲氧基苯甲酸与3, 5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸四种化合物对巨噬细胞RAW264.7增殖的影响作用。结果表明上述四种化合物对巨噬细胞RAW264.7均有细胞毒性作用，且扁蒴藤醇表现出潜在的抗炎活性作用。.为了开拓新的具有抗类风湿关节炎作用的植物药，课题组利用本项目研究中建立的体内体外活性筛选模型及成熟的提取分离技术工艺，对植物药菝葜的抗炎活性成分进行了初步研究，从菝葜中成功分离出4个具有明显抗炎活性作用的单体化合物，分别是落新妇苷、新异落新妇苷、槲皮素-3-O-α-L-Rha与黄杞苷，其中新异落新妇苷为首次从菝葜中分离出来的化合物。.本项目研究结果共完成实验研究论文3篇，其中提交SCI收录刊物2篇（1篇已接收，另1篇已返修1次），影响因子分别为1.153和1.164，提交中文核心期刊1篇（已接收）。培养毕业研究生2名。