TLR在华支睾吸虫感染致Th1/Th2免疫应答中的作用机制研究

Th1/Th2免疫应答在寄生虫感染免疫中具有重要作用。本课题组研究发现模式识别受体TLR2和TLR4表达与Th1/Th2应答及转变有关。鉴于此，本项目拟深入探讨TLR2和TLR4识别华支睾吸虫抗原调控Th1/Th2免疫应答的详尽机制。利用华支睾吸虫感染小鼠模型，采用实时定量PCR、Western blot及流式细胞术等手段动态分析TLR2和TLR4对Th1/Th2应答的作用机制；深入分析华支睾吸虫表皮抗原和排泄分泌抗原激活TLR2和TLR4对Th1/Th2极化的调控作用。在此基础上，应用蛋白质组学寻找TLR2和TLR4的华支睾吸虫配基，利用基因工程技术制备重组配基，探讨其在Th1/Th2极化中的作用。通过体内外实验，揭示华支睾吸虫抗原分子与宿主抗原提呈细胞模式识别受体（TLRs）相互作用的分子基础及免疫调控机制，为阐明华支睾吸虫感染的致病机制与临床干预提供理论和实验依据。

Th1/Th2免疫应答转变在华支睾吸虫病的发生发展中起重要作用。为此，本项目以TLR2和TLR4为切入点，从细胞水平和动物水平分别探讨TLRs调控Th1/Th2免疫应答的作用机制。进展如下:. （1）在国内首次成功建立了华支睾吸虫感染不同品系（BALB/c、C57BL6和FVB等）小鼠模型，并发现不同品系小鼠易感性不同。.（2）发现在华支睾吸虫感染BALB/c小鼠后，肝脏中TLR2、TLR4的表达后4天起开始升高，至第4周达到高峰后开始下降，而Th2亚群比例逐渐升高，且Th2/Th1比值在逐渐升高，肝脏病变由早期急性炎症浸润为主发展为后期以慢性炎性和纤维化为主。 .（3）利用华支睾吸虫感染C3H TLR4野生和TLR4突变小鼠模型，国际上首次发现TLR4突变小鼠汇管区周围炎症反应较TLR4野生明显减轻，肝纤维化程度也明显降低。.（4）利用华支睾吸虫感染BALB/c小鼠模型，在运用TLR2阻断剂基础上，首次发现TLR2在华支睾吸虫感染小鼠中后期（56d后）促进Th2型细胞增殖，而对Th1型细胞无明显作用。. （5）分离小鼠TLR4野生型和TLR4突变型DC，运用华支睾吸虫排泄/分泌产物（ESA）以及虫体粗抗原（CA）分别刺激， CA均可促进TLR4野生型DCs分泌IL-12p70、IL-10和IL-4，提示CA可以同时诱导机体的Th1与Th2免疫应答；而ESA可降低LPS诱导的IL-12p70分泌而促进IL-10的分泌，提示ESA可能通过TLR4调控DCs分化，进而抑制Th1免疫应答，促进Th2优势应答。. （6）成功分离了小鼠肝内胆管上皮细胞（MIBECs），运用TLR4特异性阻断剂，研究发现TLR4能促进ESA诱导 MIBECs的活化及其相关细胞因子/趋化因子（如IL-6、TNF-α）的释放。. （7）运用生物信息学手段预测了TLR2、TLR4的候选配基，并成功表达华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白（CsFABP）以及华支睾吸虫热休克分子伴侣蛋白（CsHSC），结果表明CsHSC能激活脾细胞并促使其分泌IL-6、TNF-α，提示CsHSC能调控宿主的免疫反应，为深入研究该蛋白的免疫调控功能奠定了基础。. 本项目首次阐明了TLR2/4识别华支睾吸虫抗原调控宿主Th1/Th2 免疫应答机制，为进一步研究华支睾吸虫病的致病机制奠定了基础。