P53基因去甲基化对del（17p）骨髓瘤细胞化疗药物敏感性的影响及其机制研究

Multiple myeloma (MM) is a kind of heterogeneity hematological malignancies.Patients with del(17p) were high risk patients with high rates of drug resistance,easily metastasis and poor prognosis.Chemotherapy and autologous transplantation can not overcome its adverse ffects on outcomes.It was reported that patients with del(17p) resulting in loss of P53 gene and one of the alleles of P53 gene was lost and another one existed, and expression level of P53 gene was low due to DNA methylation of P53 gene. We screen primary myeloma cells with P53 heterozygote deletion,compared with primary myeloma cells of normal karyotype.The sensitivity of chemotherapy after DNA demehtylation drug inntervention were observed with or without P53 gene silence by shRNA interference.Then,myeloma cell with 17p deletion transplantation tumor model was set up and DNA demethylation drug effects on tumor proliferation was observed,thus effects of P53 gene demethylation on chemotherapeutic drugs sensitivity of myeloma cells with del (17 p) and its mechanism were revealed and it would bring new hope for MM patients with del(17p).

多发性骨髓瘤（MM）是一种异质性极强的恶性血液病，17p缺失者为高危患者，耐药发生率高，易远处转移及浸润，预后极差。化疗及自体移植均不能改善其预后。研究发现17p缺失后导致定位于17p的抑癌基因P53发生杂合子缺失，即一个等位基因缺失，另一个因DNA甲基化致P53表达降低，使得P53网络调控作用减弱或丧失，从而影响疾病的治疗及预后。本项目拟通过微阵列比较基因组杂交技术筛选P53杂合子缺失的原代骨髓瘤细胞，以核型正常的原代骨髓瘤细胞为对照组，观察两组细胞应用DNA去甲基化药物干预后P53和下游靶基因表达及对化疗药物敏感性的变化；shRNA沉默P53后观察细胞对化疗药物敏感性的变化；进一步建立17p缺失原代骨髓瘤细胞移植瘤模型，观察DNA去甲基化药物对肿瘤组织增殖的影响，从而揭示P53基因去甲基化对del（17p）骨髓瘤细胞化疗药物敏感性的影响及可能机制，为17p缺失MM患者治疗带来新的希望。

多发性骨髓瘤（MM）是一种异质性极强的恶性血液病，17p缺失者为高危患者，耐药发生率高，易远处转移及浸润，预后极差。研究发现17p缺失后导致定位于17p的抑癌基因P53发生杂合子缺失，即一个等位基因缺失，另一个因DNA甲基化致P53表达降低，使得P53网络调控作用减弱或丧失，从而影响疾病的治疗及预后。本项目利用骨髓瘤细胞系NCI-H929（P53 WT/WT）和KMS-18（P53 WT/-），比较两组细胞给予不同剂量地西他滨干预后增殖及凋亡变化以及P53、MDM2、Caspase3、BCL-2基因及蛋白表达水平变化；CCK-8法检测低剂量地西他滨联合地塞米松干预后细胞增殖及凋亡的变化； siRNA沉默两组细胞P53基因后观察地西他滨单药以及地西他滨联合地塞米松干预后两组细胞增殖抑制、凋亡及对药物敏感性的变化； 动物体内观察低剂量地西他滨对P53基因缺失骨髓瘤细胞荷瘤鼠的杀瘤作用。结果显示：NCI-H929细胞P53基因mRNA及蛋白表达水平均高于KMS-18细胞，MSP法检测显示KMS18细胞P53基因呈高甲基化状态；应用地西他滨干预后两组细胞增殖受抑制，随着地西他滨浓度的增加，细胞增殖抑制率及凋亡率增加；相同浓度地西他滨干预后KMS-18增殖抑制程度重于NCI-H929细胞，差异有统计学意义；两组细胞地西他滨干预后P53、Caspase3基因及蛋白表达水平较前升高，且随着地西他滨浓度的增加而表达升高；MDM2、BCl-2表达水平降低，随着地西他滨浓度的增加而表达降低更为显著，差异有统计学意义。地西他滨可以增加KMS-18细胞对地塞米松药物的敏感性；siRNA沉默P53基因后可以恢复KMS-18细胞对地塞米松的耐药性；在荷瘤鼠模型中观察应用地西他滨具有一定抑制骨髓瘤增殖的作用。体内外实验结果提示P53基因去甲基化对del（17p）骨髓瘤细胞化疗药物敏感性具有一定的影响，通过应用低剂量地西他滨可以一定程度克服药物耐药性，增加化疗敏感性，为17p缺失MM患者治疗带来新的希望。