鸡败血支原体基因靶向载体的构建

本研究拟利用鸡败血支原体（MG）oriC构建可复制型转移载体筛选启动子，以miniTn4001为载体，在多克隆位点中插入以MG的强启动子启动的外源基因LacZ、EGFP等表达盒以及靶位点的左右臂，构建获得MG基因靶向转移载体，将该基因靶向载体转化MG，筛选转移的靶位特异性，并分析该缺失和替换对MG的复制有无影响，以确定优势靶位；利用该外源基因靶向转移载体定点重组MG Rlow毒株，电转化MG，在MG内进行靶向定位，筛选缺失和重组外源基因的克隆菌株，随后对其遗传稳定性、毒力改变、外源基因在基因组中的定位、MG中与致病相关的关键基因缺失与否等多方面进行鉴定。这将为鸡败血支原体非必需区的筛选工作奠定良好的基础。