miR-409-3p对PHF10表达失调促进胃癌进展及其分子机制研究

前期研究中我们发现miR-409-3p在人胃癌组织中表达明显下调，生物信息学分析提示miR-409-3p调控的靶基因之一是PHF10，胃癌组织中PHF10表达水平明显高于癌旁组织，表达程度与胃癌分化程度相关，下调PHF10表达可明显抑制胃癌细胞增殖，诱导胃癌细胞凋亡，与胃癌细胞过表达miR-409-3p诱导细胞凋亡相类似；胃癌细胞过表达miR-409-3p后PHF10表达下降，提示miR-409-3p可能调控PHF10的表达。为此，本项目拟分析胃癌组织中miR-409-3p表达与PHF10表达及生物学作用的相关性，上调或下调胃癌细胞miR-409-3p表达后PHF10的表达变化，以荧光素酶报告基因系统确认miR-409-3p对PHF10的表达调控作用，以动物体内实验加以验证。阐明miR-409-3p在胃癌中的生物学作用，及其对PHF10的表达调控作用。

背景：前期研究中我们发现miR-409-3p在人胃癌组织中表达明显下调，生物信息学分析提示miR-409-3p调控的靶基因之一是PHF10，而PHF10的生物学功能与调控是本课题组长期研究的内容之一，前期研究发现胃癌组织中PHF10表达水平明显高于癌旁组织，表达程度与胃癌分化程度相关，下调PHF10表达可明显抑制胃癌细胞增殖，诱导胃癌细胞凋亡，与胃癌细胞过表达miR-409-3p诱导细胞凋亡相类似；胃癌细胞过表达miR-409-3p后PHF10表达下降，提示miR-409-3p可能调控PHF10的表达。为此，本项目拟分析胃癌组织中miR-409-3p表达与PHF10表达及生物学作用的相关性，上调或下调胃癌细胞miR-409-3p表达后PHF10的表达变化，以荧光素酶报告基因系统确认miR-409-3p对PHF10的表达调控作用，以动物体内实验加以验证。阐明miR-409-3p在胃癌中的生物学作用，及其对PHF10的表达调控作用。.阐明其在胃癌发病中的作用机制。.研究内容:（1）miR-409-3p在8株胃癌细胞株与永生化胃黏膜细胞GES-1中的表达水平，及在67例胃癌及其配对癌旁对照组织中的表达水平。（2）上调胃癌细胞株SGC-7901中miR-409-3p的表达水平，观察其过表达对胃癌细胞增殖、凋亡、周期和裸鼠皮下成瘤能力等生物学行为的影响。（3）结合双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和 Western Blot等检测方法，验证PHF10为miR-409-3p作用的靶基因。.研究结果:（1）发现miR-409-3p在胃癌细胞株中的表达水平明显低于在永生化胃黏膜细胞GES-1中的表达水平。miR-409-3p表达于胃黏膜上皮细胞或胃癌细胞的胞浆内，qRT-PCR检测结果显示miR-409-3p在67例胃癌组织中表达的平均水平显著低于其在配对癌旁对照组织中表达的平均水平，且miR-409-3p的表达水平与胃癌临床病理指标相关，胃癌组织miR-409-3p表达水平低者，肿瘤组织体积较大，胃壁浸润较深。（2）上调miR-409-3p表达水平能有效抑制胃癌细胞株SGC-7901体外增殖、克隆形成、诱导凋亡，但对细胞周期无明显影响。体内试验表明，过表达miR-409-3p能够通过抑制增殖并促进凋亡来抑制胃癌细胞株SGC-7901裸鼠皮下成瘤能力。（3）生物信息学分析提示P