益气化瘀中药调控AGEs/RAGE/NF-kB信号通路促进糖尿病难愈创面血管新生的机制研究

It is found that the accumulation of advanced glycation end products(AGEs) in diabetic skin is one of the initiating factors of insufficient neovascularization in wounds. AGEs activates intracellular nuclear factor-kB（NF-kB）through receptor for advanced glycation end products(RAGE) which is on cell surfaces. NF-kB can cause injury and dysfunction of tissue repairing cells by participating immunomodulation and inducing inflammatory reaction，which can lead to inhibition synthesis and secretion of vascular endothelial growth factor（VEGF）and nitric oxide（NO）leading to insufficient neovascularization in impaired diabetic wounds. In prophase research, we have found that replenishing qi and dissipating stagnation Chinese medicine can significantly accelerate healing of impaired diabetic wounds, and the mechanisms are related to regulating oxidation stress and promoting angiogenesis. In this research, rat models of diabetic wounds are established, aminoguanidine is served as positive control, the AGEs/RAGE/NF-kB mechanism of replenishing qi and dissipating stagnation Chinese medicine in angiogenesis of impaired diabetic wounds is explored. This research can provide new experimental basis for the treatment of impaired diabetic wounds with replenishing qi and dissipating stagnation Chinese medicine.

糖尿病皮肤组织中糖基化终末产物（AGEs）蓄积是导致创面血管新生障碍的始动因素之一。AGEs通过细胞表面的糖基化终末产物受体（RAGE）途径激活细胞内核因子-kB（NF-kB），后者通过参与免疫调控，介导炎症反应，导致组织细胞受损和功能紊乱，合成和分泌血管内皮生长因子（VEGF）、一氧化氮（NO）减少，最终导致糖尿病创面血管新生障碍。前期研究发现，益气化瘀中药可以明显促进糖尿病难愈创面修复愈合，其机制与调控创面氧化应激水平，促进血管新生有关。本项目建立糖尿病大鼠创面模型，以西药氨基胍为阳性对照，进一步从AGEs/RAGE/NF-kB信号通路探讨益气化瘀中药促进糖尿病难愈创面血管新生的作用机制，为益气化瘀中药治疗糖尿病难愈创面提供新的实验依据。

背景：糖尿病皮肤组织中糖基化终末产物（AGEs）蓄积是导致创面血管新生障碍的始动因素之一，本项目拟从AGEs/RAGE/NF-kB信号通路探讨益气化瘀中药促进糖尿病难愈创面血管新生的作用机制。.研究内容：100只雄性SD大鼠除正常对照组外，腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型，随机分为模型组、益气化瘀中药组、氨基胍组，给予相应药物灌胃，8w后大鼠背部制造创面，观察创面造模后第0d、3d、7d、14d各组大鼠创面皮肤组织糖含量、微血管组织形态学改变、MVD、AGEs含量、RAGE基因表达、蛋白水平，NF-kB活性，VEGF表达量及eNOS蛋白水平。.结果：光镜、电镜观察到模型组大鼠创面皮肤组织存在微血管病理形态学变化，而益气化瘀中药组、氨基胍组大鼠创面皮肤组织微血管病理形态学变化均得到了改善。.模型组大鼠创面皮肤组织糖含量、AGEs蓄积、RAGE基因表达和蛋白水平均较正常对照组有明显上升（P<0.01，P<0.05），而益气化瘀中药组、氨基胍组大鼠创面皮肤组织糖含量、AGEs蓄积、RAGE基因表达和蛋白水平均较模型组有明显下降（P<0.01）。.模型组较正常对照组创面组织NF-kB活性明显升高（P<0.01），益气化瘀中药组、氨基胍组创面组织NF-kB活性均较模型组明显下降（P<0.05）。.模型组均较正常对照组创面组织VEGF表达量、eNOS蛋白水平、MVD均明显下降（P<0.01），益气化瘀中药组、氨基胍组创面组织VEGF表达量、eNOS蛋白水平、MVD均较模型组明显上升（P<0.01，P<0.05）。.结论：益气化瘀中药能明显降低糖尿病大鼠创面皮肤组织糖含量，减少AGEs蓄积及组织细胞表面RAGE表达，阻断由两者结合所导致的细胞内NF-kB被激活、细胞受损和功能紊乱，合成和分泌VEGF、NO减少、血管新生障碍的病理过程，从而促进糖尿病难愈创面血管新生，加速创面修复愈合，益气化瘀中药亦对糖尿病溃疡形成有预防作用。.科学意义：本项目为益气化瘀中药治疗糖尿病难愈创面提供新的实验依据，完善和发展了“益气化瘀法”治疗糖尿病难愈创面的理论。