云南地区主要民族聋病患儿易感基因突变分子病因学研究

This study aims to analyze the genetic characteristics and molecular etiology of the specific ethnic deafness gene in more than one million Yunnan population by gene sequencing technology.The research content mainly includes: the establishment and perfection of the Yunnan specific ethnic deafness gene pool, GJB2, SLC26A4, mtDNA gene and GJB3 mutation screening of the common sites, complete sequence determination of 154 deaf susceptible genes related to negative children. The new found pathogenic mutations were identified again by the Sanger sequencing method.Through the study of Yunnan specific ethnic deafness predisposing gene mutation, it will analysis the mutation frequency and characteristics in order to find new mutations, map the genetic mutations of deafness genes in different nationalities, and provide theoretical basis for the prevention and treatment of hearing loss in Yunnan region.At the same time, the project will choose the appropriate treatment and rehabilitation guidance for 1000 children with hearing impairment, and provide genetic counseling for their family members so that they could avoid hereditary hearing loss when they have the next child.

本研究拟通过基因测序技术分析云南地区人口超过百万的主要民族耳聋基因的遗传学特点和分子病因。研究内容主要包括云南地区主要民族聋病基因库的建立和完善，GJB2、SLC26A4、线粒体基因和GJB3突变常见位点的筛查，阴性患儿相关154个耳聋易感基因全序列测定，对发现新的致病突变位点再次用Sanger测序法进行鉴定。通过对云南地区主要民族耳聋易感基因突变的研究，分析其突变的频率和特点，以期发现新的突变位点，绘制各民族耳聋基因突变的图谱，为云南地区耳聋的防治提供理论基础。课题进行的同时将为1000个听力障碍的患儿选择合适的治疗方式和康复指导，并为其家庭成员进行遗传性咨询，使他们将来生二胎时避免发生遗传性耳聋。

遗传性耳聋基因检测可为临床诊断提供依据，指导生育，有效降低新生儿出生缺陷率；明确致病基因，结合临床精准评估缺陷程度及预后。通过在云南地区开展大规模测序，绘制聋病基因突变频谱，完善云南地区遗传性耳聋患者分子病因学的资料。本项目通过采集云南地区感音神经性耳聋患者血样819例，建立了耳聋生物样本库。提取患者外周血基因组DNA，用常规飞行质谱技术对常见的4个基因21个位点进行突变预筛，对排除常见耳聋基因突变的样本进行127/406/516个已知耳聋基因或全外显子组靶向序列捕获及二代测序，对发现新的疑似致病突变再次用Sanger测序进行验证。受检人群男女比例接近1：1，年龄阶段主要以儿童与青少年为主，个别成年人。基因检测结果：413人检出突变基因，检出率50.80%(413/819)，共检出76个明确的耳聋突变基因。耳聋阳性基因检出男女比例接近1:1，提示常见耳聋突变基因一性别相关性较低。在所有检出阳性突变的基因当中，突变频率最高的5个基因分别是：GJB2、SLC26A4、MYO15A、MYO7A和CDH2，以上5个基因检出率占阳性突变的54.48%，超过一半。我国常见耳聋热点突变基因包含GJB2、GJB3、SLC26A4和线粒体基因，在本研究中使用该方案检出率仅为25%，提示云南地区感音神经性耳聋患儿可能携带其他地区不常见的热点突变基因。根据本研究基因检测结果，云南地区常见突变基因与我国常见突变基因存在差异，除GJB2同样常见外，其它突变频率均存在差异。本研究检出突变的基因当中，绝大多数为外显子发生突变，但也有少数检出内含子突变致病，突变类型多为点突变，部分发生大片段缺失。此外，在本研究中，检出了SOX10、PAX3、EYA1等多个基因的新突变位点，这些基因突变通常导致综合征性耳聋，相关文章已经发表。基因检测为临床诊断遗传性耳聋提供分子遗传学依据，新变异的检出拓展了遗传性耳聋的基因变异谱。临床应重视基因检测在遗传性耳聋中的应用。综上，该研究为制定云南地区耳聋基因诊断策略及防治提供了理论基础。