DFOG抑制卵巢癌干细胞特性治疗卵巢癌的机制研究

Based on 7-difluoromethoxyl-5,4'-di-n-octylgenistein(DFOG) induced apoptosis via down-regulation FoxM1 expression in ovarian cancer cells, and inhibited self-renewal and reduced the level of phosphorylated FoxO3a protein in ovarian cancer stem cells, this project will use Magnetic activated cell sorting system (MACS) to separate and amplify CD133+ ovarian cancer sphere-forming cells derived from ovarian cancer(SKOV3、A2780 and OVCAR-3) cell lines and primary ovarian cancer tissue, and identify them as OCSCs. We will investigate the effect of DFOG on self-renewal, proliferation, epithelial-mesenchymal transition, invasion, metastasis, tumorigenic and chemotherapeutics sensitivity of OCSCs in comparison to non-sorting ovarian cancer cells. And we also explored underlying the mechanism for that regulation of FOXO3a/FOXM1 signaling inhibits the characteristics of ovarian cancer stem cells by DFOG through intervening PI3K/Akt, RAS/ERK and Wnt/β-catenin multi-signal pathways using pharmacological blocking agents and Gene regulation technology. Our findings have significant, will help us to know better about anormaly of the signaling pathways of OCSCs and the effect of DFOG on regulating it. And our findings can provide essential experimental and theoretical evidence to develop the candidate agent for therapy of ovarian cancer.

鉴于7-二氟甲氧基-5,4'-二-正辛烷氧基金雀异黄素(DFOG)通过下调FoxM1诱导卵巢癌细胞凋亡，抑制卵巢癌干细胞(OCSCs)自我更新，降低FoxO3a磷酸化水平。本项目拟从卵巢癌(SKOV3、A2780和OVCAR-3)细胞系和原发性卵巢癌组织分选和扩增OCSCs；与相应非分选卵巢癌细胞对照研究DFOG对OCSCs自我更新、增殖、细胞凋亡、上皮-间质转化、侵袭和转移、致瘤性和化疗药物敏感性的作用。综合应用药理性阻断剂和基因调控技术探讨DFOG是否通过干预PI3K/Akt、RAS/ERK及Wnt/β-catenin等多信号途径调控FOXO3a/FOXM1信号轴抑制OCSCs特性的作用机制。研究将有助于我们了解OCSCs信号传导通路异常和DFOG对OCSCs信号通路的调控作用，具有重要科学意义。研究成果能为开发和研制有效防治卵巢癌的药物提供实验和理论依据。

7-二氟甲氧基-5, 4'-二正辛烷金雀异黄酮（DFOG）是一种新型合成金雀异黄酮衍生物，对包括卵巢癌在内的多种癌症具有抗癌活性。我们针对DFOG的相关活性进行了深入研究。鉴于7-二氟甲氧基-5,4'-二-正辛烷氧基金雀异黄素(DFOG)通过下调FoxM1诱导卵巢癌细胞凋亡，抑制卵巢癌干细胞(OCSCs)自我更新，降低FoxO3a磷酸化水平。项目研究（1）从卵巢癌( SKOV3、A2780和OVCAR-3)细胞系和原发性卵巢癌组织分选和扩增OCSCs；（2）与相应非分选卵巢癌细胞对照研究DFOG对OCSCs自我更新、增殖、细胞凋亡、上皮-间质转化、侵袭和转移 、致瘤性和化疗药物敏感性的作用。（3）综合应用药理性阻断剂和基因调控技术探讨DFOG是否 通过干预PI3K/Akt、RAS/ERK及Wnt/β-catenin等多信号途径调控FOXO3a/FOXM1信号轴抑制OCSCs特性的作用机制。随着研究的逐步深入，我们进一步进行了下列研究：（1）对深入干扰IL-8/STAT3/NF-κB正反馈信号环路介导金雀异黄素抑制肿瘤相关巨噬细胞诱导卵巢癌干细胞样细胞特性进行了研究，首先，与人卵巢癌SKOV3细胞系第2代球细胞(定义的卵巢癌干细胞样细胞(OCSLCs))共培养的THP-1源性巨噬细胞(定义的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)) IL-8分泌增高、STAT3磷酸化水平升高并诱导SKOV3细胞肿瘤球形成能力增强和干细胞标志物CD133、CD44和ALDH1蛋白表达上调。其次金雀异黄素处理OCSLCs共培养TAM，有效降低共培养条件培养基中IL-8浓度，抑制TAM细胞STAT3蛋白磷酸化。（2）c-Myc被证实是let-7d直接靶基因，参与了let-7d诱导卵巢癌对的DFOG在卵巢癌中的药物敏感性的直接靶标。我们的研究结果表明增加的核c-Myc表达是早期卵巢癌进展的不利因素。let-7d直接靶击c-Myc抑制PI3K / AKT信号抑制c-Myc通过灭活卵巢癌中的PI3K / AKT信号传导显著增加诱导卵巢癌细胞对DFOG的敏感性。上述研究将有助于我们了解OCSCs信号传导通路异常和DFOG对OCSCs 信号通路的调控作用，具有重要科学意义。研究成果能为开发和研制有效防治卵巢癌的药物提供实验和理论依据。