警报素（alarmin）HMGN1作为DNA疫苗佐剂的应用基础研究

警报素（alarmins）是近年来提出的一类具有树突状细胞募集和活化双重作用的内源因子。Alarmins可以通过促进抗原的摄取、处理和呈递来增强对抗原特异性免疫反应的诱导，从而在对获得性免疫进行预警的过程中起到关键作用。该概念提出后，得到了越来越多的研究者的支持。现已鉴定出多种alarmins，且最新的研究提示由于alarmins能够增强抗原特异性的免疫反应，因此是肿瘤疫苗佐剂的理想的候选者。本课题组刚刚鉴定出一个新的alarmin- - HMGN1，并发现HMGN1是已知最强的刺激Th1类免疫反应的alarmin。本课题中我们拟在前期工作的基础上进一步深入研究HMGN1活化DCs所涉及的受体和相关信号通路，并通过构建编码可分泌的HMGN1-TAA融合蛋白的基因，经体内外实验考察相应的融合蛋白诱发抗肿瘤免疫的能力，检验HMGN1作为肿瘤疫苗佐剂的可能性及应用价值。

警报素（alarmins）指一类具有树突状细胞募集和活化双重作用的内源因子，它们可以通过促进抗原的摄取、处理和呈递来增强对抗原特异性免疫反应的诱导，从而在对获得性免疫进行预警的过程中起到关键作用。高迁移率族核小体结合蛋白1（HMGN1）是我们发现的新的警报素，而且还是已知最强的刺激Th1类免疫反应的警报素。体内实验显示，与野生型小鼠相比，过表达OVA的鼠胸腺瘤E.G7-OVA在Hmgn1-/-小鼠体内生长更为迅速，而且其脾中OVA特异性的CD8+细胞更少；另一方面，与未转染或转染空载体的E.G7-OVA细胞相比，分泌型表达HMGN1的E.G7-OVA细胞在小鼠体内成瘤率较低，生长较为缓慢。根据标书要求，我们成功构建了所有DNA疫苗及其相应对照，并完成了动物实验的预实验。根据预实验的结果，选定携带Sig-HMGN1-gp100融合基因的载体作为肿瘤DNA疫苗，与相应的对照疫苗（空载体、携带Sig-HMGN1或Sig-gp100基因的载体）一起，通过基因枪进行活体转染，按照标书的研究方案进行小鼠体内实验，并对结果进行了多次重复验证。体内实验的结果表明，携带Sig-HMGN1-gp100融合基因的肿瘤DNA疫苗可以有效抑制小鼠体内gp100阳性的B16F1黑色素瘤的生长。有趣的是，实验结果同时表明只进行两次免疫接种即可达到与6次免疫接种相同的效果。进一步的分析表明，经该疫苗免疫的小鼠的引流淋巴结内CD4+、CD8+细胞数量无显著变化，但其中CD3+CD8+IFNγ+细胞比例显著增高，同时CD3+CD8+IL-13+细胞比例降低，提示以HMGN1为佐剂的肿瘤疫苗可以通过提高Tc1细胞的比例发挥抗肿瘤作用。本课题首次证明警报素可以作为肿瘤疫苗佐剂诱导肿瘤特异性免疫反应，进一步验证了和丰富了警报素理论，深化了对警报素在获得性免疫的诱导过程中所起关键性作用的认识，揭示了警报素在肿瘤生物治疗领域广阔的应用前景。