回药爱康方抗非小细胞肺癌作用机理的实验研究

在以往回药爱康方治疗中晚期肺癌确切临床疗效基础上，本研究拟选用三种不同非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株（人肺腺癌A549细胞株、人肺鳞癌SK-MES-1细胞株和小鼠Lewis肺癌细胞株）；应用回药爱康方及协同化疗通过体外和体内实验，采用流式细胞仪检测法、免疫组化法及Western blot法观察以下内容：① 该方对三种不同NSCLC细胞株的抑制作用，检测增殖细胞核抗原（PCNA），bcl-2和p53基因的表达，观察该方诱导NSCLC细胞凋亡的机制；② 该方对表皮生长因子受体（EGFR）、NF-κB水平的影响，观察该方对调节癌细胞信号转导作用机制；③ 该方对CD4+CD25+Tr、sIL-2R等免疫逃逸相关因子影响，观察该方对肿瘤免疫功能的调节作用机制。进一步深层次地探讨该方抗非小细胞肺癌可能的作用机理，进而为把该方开发为回药新药奠定基础。

选用三种不同NSCLC细胞株（人肺腺癌A549细胞株、人肺鳞癌SK-MES-1细胞株和小鼠Lewis肺癌细胞株）以及人肺腺癌A549细胞株荷瘤裸鼠和Lewis肺癌荷瘤小鼠；通过体外和体内实验应用回药爱康方以及协同化疗观察以下内容.研究结果：（1）回药爱康方能有效地抑制Lewis肺癌的生长，提高荷瘤小鼠的生活质量，减轻化疗对小鼠免疫器官指数的影响，免疫组化结果发现其协同化疗能降低瘤组织p53mt蛋白的表达（与对照组相比P<0.05,结果有统计学意义）;(2)回药爱康方含药血清对Lewis肺癌细胞周期的影,研究表明回药爱康方含药血清可通过影响LLC的细胞周期抑制其增殖;(3）回药爱康方含药血清对肺癌A549细胞凋亡的影响，本实验发现各时段5%，10%，20%体积分数含药血清可提高A549的凋亡率(P＜0. 05)，72h爱康方高剂量联合环磷酰胺组药物体积分数5%提高至20%时，A549细胞的凋亡率由25.31%上升至35.43%，坏死率由20.38%上升至40.61%；（4）回药爱康方含药血清对人肺鳞癌SK—MES－1细胞增殖及周期的影响：不同浓度的AKF含药血清分别作用于SK－MES－1细胞不同时间后，对其生长均有一定的抑制率（与NS组比较P＜0. 05）；（5）回药爱康方含药血清对人肺腺癌A549细胞生长增殖的影响：回药爱康方可抑制A549细胞的生长增殖（与对照组比较P＜0. 05）；（6）回药爱康方含药血清抑制Lewis肺癌细胞增殖和诱导凋亡的研究：回药爱康方对Lewis肺癌细胞的抑制作用与剂量存在正相关性，且单独爱康方低剂量组和高剂量组对细胞的抑制率差异有存在统计学意义(P<0.05)；（7）回药爱康方抗Ｃ57小鼠肺癌转移及影响bcl-2的表达：药爱康方能降低肺癌转移率和lewis肺癌小鼠瘤细胞bcl-2蛋白的表达(P<0.05）；（8）回药爱康方对Lewis肺癌C57小鼠瘤细胞PCNA、SIL-2R表达的影响：回药爱康方高中低剂量以及高中低剂量与环磷酰胺联合用药可以通过调节PCNA以及Sil-2的表达来抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.05)。