树突状细胞A20/ABIN1/TAX1BP1复合物在抗HCV感染中维持“免疫稳态”的分子机制

About 80% patients infected with HCV shows chronic infection and immunological tolerance. The standard pegylated interferon (PEG-IFN) and ribavirin (RBV) treatment provides a sustained virological response(SVR) in about 50-80% of chronic hepatitis C patients who rarely associate with severe liver damage and autoimmune diseases. We call this phenomenon "immune homeostasis" and its mechanism is not entirely clear at present. The collaboration of functional DC subsets and regulation of the key negative feedback inhibitor A20/ABIN1/TAX1BP1 complex within DCs potentially constitute the central link to maintain the "immune homeostasis". We have initially proved the inverse correlation between A20 expression and DC function in our previous studies. Thus, in the present study, we will examine the hypothesis that A20/ABIN1/TAX1BP1 complex plays an important role in "immune homeostasis" maintaining during HCV infection and antiviral responses. To evaluate this hypothesis, we will collect chronic HCV infected patients with different clinical types or interferon treatment phases and analyse proportion of IFN-DCs in peripheral blood mononuclear cells and expression level of A20/ABIN1/TAX1BP1 in IFN-DCs. Then overexpression or silence of intracellular ABIN1 in IFN-DCs induced in vitro to detect the functional changes of IFN-DCs in promoting differentiation and proliferation of HCV-specific CD4+/CD8+ T cells. Finally, we will explore the molecular mechanism underlies the interaction between A20/ABIN1/TAX1BP1 complex and IFN-α induced signaling pathway. A complete understanding of immune homeostasis and its mechanism may help us to find out new targets for anti-HCV therapy.

慢性HCV感染者多处于免疫"耐受"状态，IFN-α治疗可使50-80%慢性患者获得SVR，却罕有肝功严重损害及自身免疫病发生，这种现象我们称为"免疫稳态"，其机制尚不完全清楚。IFN-α对HCV的有效清除可能与其诱导的具有强细胞毒性及免疫刺激能力的DC亚群IFN-DC有关。A20/ABIN1/TAX1BP1复合物对IFN-DC功能的负性调控可能是维持"免疫稳态"的分子基础。因此，结合我们对慢性HCV患者DC上A20的研究结果提出以下思路：分析不同临床类型及干扰素治疗阶段的丙肝病人IFN-DC上A20/ABIN1/TAX1BP1表达；体外研究ABIN1表达变化对IFN-DC及A20/ABIN1/TAX1BP1复合物功能的影响；探索A20/ABIN1/TAX1BP1复合物影响IFN-α诱导的抗HCV信号通路的作用靶点，以期阐明该复合物在HCV感染中维持DC"免疫稳态"中的分子机制

HCV感染后约80%的病人表现为慢性,机体处于免疫“耐受”状态，接受IFN-α联合利巴韦林治疗可使50-80%慢性HCV病人获得SVR，却很少发生肝功严重损害，罕有自身免疫病发生，这种现象我们称为“免疫稳态”，其机制目前还不完全清楚。具有免疫诱导和调节功能的DC亚群间的协作以及DC内负性免疫调控通路的关键分子A20/ABIN1/TAX1BP1复合体可能是维持“免疫稳态”的中心环节。结果：1. 本课题分析了不同临床类型及干扰素治疗阶段的丙肝病人IFN-DC上A20/ABIN1/TAX1BP1表达，发现DC A20表达升高。2. HCV转染Huh7.5细胞后与DC细胞共培养24h、48h后发现HCV对DC细胞表达STAT1、STAT2均有影响。与对照组相比，DC细胞中A20、ABIN1、STAT1和STAT2等分子表达均升高。3. 成功构建了pAdGV314/ABIN1的表达载体。4. 成功构建了pAdGV314/A20的表达载体。5. A20具有抑制LPS对单核细胞NF-κB的激活作用，降低细胞TNF-α和IL-6的分泌水平，对单核细胞LPS炎症应答具有负向调节作用，具有抗炎活性。IL-6、TNF-α并没有完全降到LPS刺激前的水平，说明还存在其他的通路诱导炎症反应。 6. HCVcc刺激THP-1细胞后可促进A20和ABIN1表达。7. 对A20的表达与标志mDC功能的指标进行了相关性检验，结果显示A20表达与 HLA-DR、CD86 和 CCR7 的表达以及 IL-12 的分泌呈密切负相关。 HCV 慢性感染者中的 mDC 在成熟、细胞因子分泌及免疫刺激能力方面都存在缺陷。 8. A20 表达缺陷的 mDC 较转染无关 siRNA 的 mDC 及干扰前 mDC 分 泌 IL-12 明显增加。混合淋巴细胞共培养后发现 A20 表达缺陷的 mDC 刺激 T 细胞增殖的能力较干扰组及干扰前的 mDC 显著增强作用。提示 A20 的表达异常可能是 HCV 慢性感染过程中 mDC 失能的又一重要分子机制。本研究为建立肝脏“免疫稳态”的概念提供理论依据，为不同临床表现类型给予合理的免疫学解释，并为HBV等慢性病毒感染提供新理念和研究思路。.