TRAM基因选择性调控LPS失控性炎症反应的实验研究

LPS诱导的失控性炎症反应是其脓毒症的启动因素，尽管其信号通路研究取得重大进展，但失控性炎症反应的理想干预靶点未能确定。近年来细胞内衔接分子TRAM和Mal在MyD88非依赖和依赖信号途径的作用成为研究热点。我们前期研究结果：TRAM siRNA抑制LPS刺激RAW264.7细胞的NF-кB活性，提出TRAM基因可能是一个选择性调控LPS诱导失控性炎症反应的理想干预靶点。本项目拟构建TRAM siRNA和Mal siRNA慢病毒载体，导入RAW264.7，分别阻断LPS细胞内MyD88非依赖和依赖信号途径，在细胞水平，研究TRAM和Mal的选择性调控作用，及信号通路间相互关系；通过尾静脉注入，分别沉默小鼠TRAM和Mal基因，活体研究其抗LPS脓毒症休克作用及对机体的影响，通过对比研究，证实本假说。这将深化我们对LPS炎症反应分子机制的认识，为感染疾病的基因治疗新途径奠定理论和实验依据。

本项目原计划研究TLR4信号途径下游衔接分子TRAM和Mal在MyD88非依赖和依赖信号途径对LPS诱导的失控性炎症反应的影响。预期siRNA干预TRAM基因，可以通过抑制MyD88非依赖信号途径，进而干预LPS诱导的失控性炎症反应。但有国外研究小组已报道MyD88依赖信号途径是失控性炎症反应的主要靶标。故对实验计划作出了修订。目前以RAW264.7 细胞系为对象，完成了针对TRAM和Mal衔接分子siRNA序列的筛选和干扰工具的构建，为相关离体和在体TLR4信号干预研究提供了有效工具。我们为后续实验引入了MyD88和TRIF的敲除小鼠。目前，相关实验正在进行。我们还在相关研究中发现，阿片类受体对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用并非与阿片受体有关，而可能是作为TLR4受体的配体实现，为阿片类药物在临床中合理应用提供了重要依据。已有2篇中文，1篇SCI期刊论文投稿待发。预期在结题1年后评估阶段，我们有望达成发表2篇SCI期刊论文的目标。