筛选猪瘟病毒结合靶细胞的配体表位研究

The precise location the ligand epitope of CSFV combination with a target cells to provide a new way of the effective control the CSF. Therefore, the studying and screening CSFV combined with the ligand epitope with a target cell has an important scientific value.according to the research of the receptor and ligand of CSFV all over the world and this team early research results. ①screening and idtification of the ligand epitope of the classical swine fever virus. ②research the effect of ligand epitope peptides that inhibit CSFV infection by virus infection inhibiting assay. we designed and synthesized a seris of peptides according to the amino acid sequence of the glycoprotein E0 E1 and E2 of the CSFV by bioinformatics technique. Research the interation of peptides and corresponding cell line. Screening ligand epitope peptide of CSFV binding target cells. Determination the function of the epitope by virus infection inhibiting experiments. This research lays the function for further study novel vaccine and new drug and infectious mechanism of CSFV invasion target cell.

精确定位猪瘟病毒结合靶细胞的配体表位，对有效控制猪瘟提供新途径。因此，研究和筛选猪瘟病毒结合靶细胞的配体表位具有重要的科学价值。本项目研究在国内外关于猪瘟病毒（CSFV）受体与配体研究的基础上，根据本课题组前期研究的结果，重点研究：①筛选和鉴定CSFV受体与配体相互作用时的配体表位；②通过病毒感染抑制试验初步研究配体表位多肽对CSFV感染的抑制作用。项目研究依据CSFV的Ems，E1，E2三种蛋白为基础和生物信息学分析结果，设计合成配体蛋白多肽，研究多肽与相应细胞系的相互作用，确定CSFV结合靶细胞的配体结合表位，通过病毒感染抑制试验初步确定其表位功能。为进一步研究CSFV侵入靶细胞的感染机制和新型疫苗、新型药物的研制奠定基础。

Erns、E1和E2是CSFV的三种与吸附和侵入靶细胞有关的结构蛋白。为确定CSFV与病毒受体结合的具体配体表位信息，本研究利用生物信息学技术分析CSFV Erns、E1和E2三种蛋白一级结构的氨基酸序列，设计合成10条多肽，以PK-15细胞为靶细胞，进行多肽与靶细胞结合试验和病毒阻断试验筛选鉴定CSFV的配体表位；然后通过多肽抑制CSFV感染靶细胞试验测定其感染抑制功能。结果显示，E2蛋白上的一段多肽SE24在0.2mmol/L、0.1mmol/L、0.05mmol/L和0.025mmol/L能有效结合PK-15细胞；病毒阻断试验显示CSFV可以阻断多肽SE24结合PK-15细胞；多肽抑制CSFV感染试验表明多肽SE24能抑制CSFV感染PK-15细胞，具有感染抑制功能。通过结合、病毒阻断和感染抑制试验成功筛选出一条CSFV配体表位SE24，位于E2蛋白上，其序列为VHASDERLGPMPCRPKEIGSSAGPVRKTSCTFNYAKTGKNKYYEPRDSYF。为进一步精确定位SE24多肽上的配体表位信息，截取并合成了SE24多肽上的2段序列，结合试验和阻断试验证实多肽SE241和SE242可以有效结合PK-15细胞，并且SE241和SE242与PK-15细胞的结合可以被CSFV阻断，初步确定SE241和SE242为CSFV结合靶细胞的配体表位，进一步精确了CSFV结合靶细胞的配体表位信息，为研制抑制CSFV感染靶细胞的药物或疫苗奠定基础。