miR-193a-5p调控肝细胞肝癌5-氟尿嘧啶耐药的基础和转化医学研究

Hepatocellular carcinoma( HCC) is one of the most malignant and dangerous diseases for its inscrutable chemoresistance .microRNAs are small non-coding RNAs which play an important role in chemoresistance.Our previous study revealed that DNA methylation_mediated miR-193a is hypomethylated in 5-fluorouracil(5-FU) resistant cells,but hypermethylated in 5-FU sensitive cells.In this project, we are going to probe the mechanism details of miR-193a-5p dictates 5-FU resistance in HCC by using a series of molecular and cellular biotechnologies, such as virus transfection, RNA interfering and xenograft model treating,ect. Meanwhile, we will detect the status of miR-193a DNA methylation, the expression level of miR-193a-5p and its target gene in clinical samples, and analyze the potential relevance among these molecules to screen a biomaker which can anticipate the resistant characteristics of each patient before treatment.The expected results of this project will present us the detail mechanism of miR-193a-5p dictates 5-FU resistance in HCC, and the molecular events of which would become the targets for the future development and use of the assay for rationale 5-FU therapy of HCC.

肝癌细胞的耐药性严重制约肝癌化疗的疗效，威胁肝癌患者的生命。miR-193a基因是我们首先发现的与肝癌细胞5-FU耐药性相关的microRNA，它的表达受DNA甲基化调控。本项目在既往研究的基础上，拟以5-FU耐受性明显差异的肝癌细胞系作为对象，通过核酸转染、siRNA干扰、病毒感染以及裸鼠成瘤等技术，在分子、细胞和动物水平上详尽探求miR-193a-5p调控肝癌细胞5-FU耐药的作用机制。同时，在肝癌临床样本中复核miR-193a的DNA甲基化、miR-193a-5p及其靶基因的表达水平，分析它们与5-FU介入治疗的肝癌患者预后的相关性，以期筛选出能在临床化疗之前有效预测肝癌耐药特征的分子标志物。研究将有效地揭示miR-193a-5p在肝癌5-FU耐药性调控中的作用机制，深度评估其作为肝癌化疗耐药性预警标志物的应用价值，为肝癌临床治疗提供新靶点，为我国肝癌化疗耐药性研究提供新的认识。

耐药性是制约肝癌化疗的疗效的主要原因之一，牵涉其中的事件复杂，机制不清。miR-193a是我们首先发现的与肝癌细胞5-FU耐药性相关的受DNA甲基化调控的microRNA，既往研究发现其表达产物miR-193a-3p可通过调控其靶基因SRSF2的蛋白表达来调节肿瘤细胞耐药性。miR-193a-5p是miR-193a的另外一种产物，它是否调控肝癌细胞5-FU耐药性？课题以5-FU耐受性明显差异的肝癌细胞系作为对象，通过核酸转染、siRNA干扰和病毒感染等技术，在分子、细胞和动物水平上详尽探求miR-193a-5p调控肝癌细胞5-FU耐药的作用机制。同时，在肝癌临床样本中复核miR-193a的DNA甲基化、miR-193a-5p及其靶基因的表达水平，分析它们与5-FU介入治疗的肝癌患者预后的相关性，以期筛选出能在临床化疗之前有效预测肝癌耐药特征的分子标志物。研究结果表明，miR-193a-5p可以通过下调TP73蛋白的表达而提高肝癌细胞SMMC-7721对5-FU的敏感性，TP73与TP63，SRSF2之间有协同作用，这更进一步丰富了miR-193a调控肝癌耐药性的分子途径。但是，研究没有观察到miR-193a的甲基化水平，或者是miR-193a-5p的表达水平与患者接受5-FU等其他化疗药物之间存在相关性，而其靶基因TP73的表达在不同生存时间和分期分级中有差异表达，提示TP73是肝癌相关的抑制因子，其表达除了受miR-193a-5p调控外还应存在其他调控方式。这为今后研究miR-193a/SRSF2/TP73调控肝癌耐药性奠定了基础。