FOXO3基因多态性与儿童急性淋巴细胞白血病发病机制的研究

儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）是儿童最常见的恶性肿瘤，我国每年新增病例超过一万例，严重威胁儿童的生命。ALL是环境和遗传因素共同作用的结果。FOXO3基因参与调控细胞周期、凋亡，具有重要的抑癌作用。本课题前期儿童ALL临床病例-对照关联性研究中发现，FOXO3基因的2327C>T（rs4946936）多态性位点与ALL的危险性有关。本课题拟采用荧光素酶报告基因转染、RT-PCR、Western blot以及细胞增殖（MTT）等实验方法，从离体水平探讨FOXO3基因具有潜在功能学效应的SNP位点对该基因转录后调控的影响及其可能的分子机制，并通过检测蛋白表达量及其功能，从整体水平验证离体功能学研究结果。进而将微观实验结果与宏观关联性研究相结合，初步阐明FOXO3基因参与ALL发生发展可能的生物学机制，为进一步寻找儿童ALL发病易感性的生物学标志，并为其治疗及预后判断提供理论依据。

本课题通过儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）临床病例-对照关联性研究发现，父母饮酒以及房屋装修史是儿童ALL发病的危险环境因素，FOXO3a 基因3’UTR的rs4946936（C>T）多态性位点与ALL的危险性有关，T等位基因能够导致儿童ALL发病风险的增高。本课题进一步采用荧光素酶报告基因转染、RT-PCR、Western blot 以及细胞增殖（MTT）等分子生物学实验方法，发现：（1）携带T等位基因的ALL患儿体内FOXO3a表达水平显著高于携带C等位基因的ALL患儿；（2）C>T的突变导致miRNA-223和FOXO3a基因3’UTR的结合能力下降，FOXO3a mRNA高表达；（3）细胞增殖实验发现转染突变型质粒的Jurket细胞和转染野生型质粒的Jurket细胞活性无统计学差异。本项目首次报道rs4946936多态性与显著增高的ALL易感性相关，并发现该位点的突变影响miR-223和FOXO3a基因3’UTR的结合能力，引起FOXO3a mRNA水平的升高，而文献报道的FOXO3a mRNA的高表达会导致白血病细胞的不断增殖和不良预后，与我们的结果相辅相成。