ROCK在TGF-β1/CTGF信号通路调控肝癌血管生成拟态中的分子机制及中药的干预作用

There is a close relationship between vasculogenic mimicry and migration and invasion in Hepatocellular carcinoma(HCC). It shows that Rho/ROCK signaling pathway, especially ROCK plays a key role in the formation and development of vasculogenic mimicry in HCC. What’s more, tumor micro-environment, epithelial-mesenchymal transition of tumor cells and other factors can also influence vasculogenic mimicry in HCC. It is confirmed that there is signal cross-talk between Rho/ROCK signaling pathway and TGF-β1/CTGF signaling pathway. So we propose that TGF-β1/CTGF signaling pathway regulates vasculogenic mimicry in HCC, in which ROCK plays an core role as a key signal molecule. In this study, hepatoma cell lines with different migration potential and human hepatocellular carcinoma model in nude mice are taken as subjects. Lentivirus, gene silencing, western-blot and other techniques are taken to detect the transpription and expression of key signal molecule in ROCK, TGF-β1/CTGF signaling pathway and vasculogenic mimicry in HCC, so as to declare the molecular mechanism of ROCK, TGF-β1/CTGF signaling pathway in vasculogenic mimicry in HCC and the effect and molecular mechanism of Biejiajianwan on vasculogenic mimicry in HCC. This study will provide not only a new way for the clinic in treating tumor, but also theoretical basis for clinical use of Biejiajianwan.

肝癌血管生成拟态与肝癌转移侵袭密切相关。研究发现肝癌血管生成拟态的形成与进展受Rho/ROCK信号通路的调控，ROCK在调控中起关键作用；同时肝癌血管生成拟态还涉及肿瘤微环境及癌细胞上皮间质化等因素影响，TGF-β1/CTGF通路与之密切相关；且研究证实Rho/ROCK与TGF-β1/CTGF通路间存在信号串扰。所以我们预测TGF-β1/CTGF通路参与肝癌血管生成拟态调控，而ROCK作为关键信号分子在调控中起核心作用。本研究以不同肝癌细胞株及裸鼠人肝癌模型为研究对象，采用慢病毒、基因沉默、Western等技术检测ROCK、TGF-β1/CTGF及血管生成拟态关键信号分子的转录和表达，研究ROCK在TGF-β1/CTGF通路调控肝癌血管生成拟态的分子机制；阐明鳖甲煎丸对肝癌血管生成拟态的影响及分子机理。本研究将为临床抗肿瘤血管治疗提供新的思路，为鳖甲煎丸的临床应用提供更充分的理论依据。

肝癌血管生成拟态（VM）是导致肝癌细胞生长转移的重要因素，Rho/ROCK通路参与了肝癌VM的形成，ROCK是调控的关键靶点。Rho/ROCK与TGF-β1/CTGF通路间存在信号串扰，抑制ROCK能部分阻断TGF-β1/CTGF通路的生物学效应。在肝癌VM的形成过程中TGF-β1/CTGF通路是否有作用？这一作用是否能被ROCK调控？鳖甲煎丸能抑制肝癌生长转移，能否影响肝癌VM形成，是否通过ROCK及TGF-β1/ CTGF信号通路实现的调控？.本研究以肝癌细胞及裸鼠肝癌原位移植瘤模型为研究对象，采用慢病毒、ELISA、Western-blot、RT-PCR等检测ROCK、TGF-β1/CTGF信号通路及VM生成关键信号分子的转录和表达，探讨ROCK与TGF-β1/CTGF通路信号因子对肝癌VM的调控作用及其相互关系，进一步阐明鳖甲煎丸对肝癌VM的作用及分子机制。.我们首先研究了ROCK和TGF-β1对三维培养的肝癌细胞VM形成的影响，发现抑制ROCK的表达可以降低VM的形成；而TGF-β1的诱导可以促进VM的形成，但这一作用受到ROCK表达水平的影响。接着研究了ROCK对TGF-β1/CTGF通路的影响，发现低表达的ROCK表达可以降低PI3K、CTGF的水平，抑制Akt、VE-cadherin、MMP-9的转录活性，通过这些与VM形成相关的信号分子减少进一步抑制了VM的形成。最后研究了鳖甲煎丸对HepG2细胞和原位移植瘤裸鼠的影响，发现鳖甲煎丸能够抑制裸鼠移植瘤的生长及HepG2细胞VM的形成，这一作用是通过抑制ROCK1、ROCK2、TGF-β1、PI3K、Akt、VE-cadherin、CTGF、MMP-2、MMP-9的表达实现的。.通过研究初步证实：.1.TGF-β1/CTGF通路信号分子对肝癌细胞VM的形成具有促进作用，且这一作用受到ROCK的调控。.2.鳖甲煎丸能够抑制裸鼠肝癌的生长，这一作用与其能够抑制肝癌细胞VM的生成密切相关。.3.鳖甲煎丸通过同时抑制ROCK和TGF-β1/CTGF通路信号分子的表达，来达到抑制肝癌细胞VM的形成以及肝癌生长的作用；符合鳖甲煎丸多层次、多靶点的药理作用特点。.本研究有助于进一步揭示鳖甲煎丸抗肝癌的分子机制，为该药临床应用提供更充分的理论依据；同时对于深化和完善原发性肝癌的基础研究具有重要意义。