益气温阳解毒法干预癌性恶病质细胞因子-UPP激活所致骨骼肌萎缩的机制研究

对CC发病机制深入研究，构建假说：细胞因子活化，UPP激活，E3组分表达上调是导致肌肉萎缩，体重进行性下降的关键环节；在前期研究基础及"脾肺同为后天之本"理论指导下，设益气温阳解毒法预防干预CC，制保元解毒汤，以脾肺双治，气血双生，解毒祛邪；建立小鼠CC模型，研究UPP及E3组分在CC发生机制中的作用及中药的预防干预，监测动物生活质量、中位生存期、体重下降率，检测细胞因子活性，称量肌肉重量，观察肌纤维形态，计算肌蛋白降解率，RT-PCR、western-blotting检测肌肉组织泛素、E214K、E3组分（Atrogin-l、MuRF1）mRNA和蛋白水平；构建TNF-α诱导肌肉细胞营养不良模型，中药含药血清干预，观察细胞形态，蛋白降解率，检测UPP组分mRNA和蛋白水平。从体内、体外途径，深入探讨细胞因子-UPP激活在骨胳肌萎缩中的机制及保元解毒汤的干预调节作用。

目的：体内建立C57BL/6小鼠癌性恶病质模型，保元解毒汤干预后进行生活质量评价，探讨保元解毒汤对模型动物生活质量的干预作用及对肌萎缩相关蛋白的影响；体外观察保元解毒汤含药血清干预TNF-α诱导的小鼠成肌细胞(C2C12)萎缩模型中肌管形态变化，检测Ubiquitin、E214k等RNA和蛋白表达水平，探讨保元解毒汤干预肌肉蛋白降解的作用机制。方法：体内研究：C57BL/6小鼠右腋皮下接种lewis 细胞建立癌性恶病质小鼠模型。50只小鼠随机分为五组：正常对照组(A)、模型对照组(B)、中药干预组(C)、中药预防干预组(D)和醋酸甲羟孕酮组(E)。观察小鼠体质量，摄食量，饮水量，瘤体积，瘤重，腓肠肌质量，肌纤维细胞横径，生存期的变化； HPLC法测腓肠肌3-MH含量，免疫组化、RT-PCR和WB方法测定肌肉中Atrogin-l、MuRF-1 mRNA和蛋白表达。体外研究：HPLC定性检测保元解毒汤含药血清，建立TNF-α诱导的肌细胞萎缩模型，观察肌管形态变化。实验分为正常对照组，TNF-α干预组，含药血清组。含药血清干预后，qPCR法和WB法检测肌细胞中Ubiquitin、E214k、Atrogin-1、MuRF-1mRNA及蛋白表达。结果：体内：药物干预后，C组和D组小鼠的体质量、摄食量和饮水量均显著增加（P<0.05），瘤体积和瘤重显著减小（P<0.05），腓肠肌质量和肌纤维细胞横径显著增大（P<0.05），3-MH含量显著降低（P<0.05），生存期明显延长（P<0.05），Atrogin-1、MuRF-1mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。体外：HPLC结果显示含药血清中含有人参皂苷Rb1、绿原酸、阿魏酸、乌头碱。含药血清组细胞肌管融合速度快，肌管萎缩不明显，肌管横径较宽（P<0.05）。Ubiquitin、E214k、Atrogin-1、MuRF-1mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：保元解毒汤可提高恶病质小鼠生活质量，延长生存期。降低腓肠肌中3-MH含量。保元解毒汤含药血清能够显著降低肌细胞中Ubiquitin、E214k、Atrogin-1、MuRF-1mRNA及蛋白表达水平，提示保元解毒汤能通过ATP-泛素-蛋白酶体信号途径（UPP）抑制肌细胞萎缩，可为临症治疗癌性恶病质提供有效方药。