特异结合唾液酸化LewisX抗原DNA适配子在抑制乳腺肿瘤转移中的应用

运用SELEX技术筛选唾液酸化LewisX抗原DNA适配子，分析该DNA适配子在乳腺癌诊断和治疗中的作用，通过多轮的体外筛选、鉴定得到特异结合唾液酸化LewisX抗原DNA适配子。应用该DNA适配子建立起体外血清学检测肿瘤早期转移的方法: 酶联寡聚核苷酸吸附试验(ELONA)和荧光标记的DNA适配子流式细胞分析。并通过对该DNA适配子的化学修饰和标记，在乳腺癌转移小鼠模型体内建立体内肿瘤转移早期诊断的方法，为手术清除转移灶奠定基础。体外分析该DNA适配子抑制MCF-7乳腺癌细胞结合E-选择素和P-选择素的能力，为乳腺癌转移治疗提供 理论。在乳腺癌转移小鼠模型体内分析SLewisX DNA适配子抗乳腺癌转移的效果，为临床体内治疗提供理论基础。从而为乳腺癌的早期转移血清学诊断、体内分子成像诊断及筛选新型抗乳腺癌转移小分子药物奠定基础。

目标：建立体外获得唾液酸化路易斯抗原X( Sialyl Lewis X；SLeX) ssDNA适配子（aptamers）的方法，并检测唾液酸化Lewis X的DNA 适配子对肿瘤细胞转移的影响。分析量子点标记该DNA适配子在乳腺癌早期转移诊断和治疗中的作用，为建立检测肿瘤早期转移体内分子成像诊断技术。方法 构建长度为70nt的初始随机单链DNA库，运用指数富集配体的系统进化技术（SELEX技术）获得SleX的ssDNA适配子。测定适配子与SLeX的亲和力。采用粘附实验、Transwwell小室体外侵袭实验，检测该适配子对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞体外侵袭的影响。分析量子点标记该DNA适配子在乳腺癌MDA-MB-231细胞成像效果。结果 经逐轮筛选，所得富集库与SLeX的亲和力逐步提高（OD值从0.171增加到了1.224），大部分适配子克隆测序后与预期相符。 该DNA适配子可以有效的抑制乳腺癌细胞与E-选择素粘附，粘附细胞数随适配子浓度的增加而减少(p<0.01)，20nmol浓度的适配子与单克隆抗体CSLEX-1效果相似；Transwell侵袭实验中，5nmol、10nmol、20nmol适配子组的侵袭细胞数分别为159±3.27、142±5.50、115±5.07，与对照组 (178±4.64) 相比差异具有显著意义(p<0.01)。量子点标记该DNA适配子在乳腺癌MDA-MB-231细胞效果佳。结论 首次在国内外运用指数富集式配基系统进化（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment, SELEX)技术，经第9 轮筛选获得的ssDNA 适配子，并发现该DNA 适配子与slex 抗原的体外结合有高度的特异性及高亲和力。首次在国内外检测并发现该特异结合唾液酸化LewisX 抗原的DNA 适配子可以抑制乳腺癌细胞与E-选择素粘附，阻断Lewis-selectin 途径，抑制乳腺癌细胞体外侵袭转移。首次成功在乳腺癌MDA-MB-231细胞上用量子点标记该DNA适配子，荧光强度效果佳。发表sci论文1篇，中华论文5篇，已接受待发表sci论文1篇，培养研究生6名，取得省级科重大研成果1项。