上皮间质转化在非小细胞肺癌吉西他滨耐药形成中的作用

上皮间质转化（Epithelial mesenchymal transition, EMT）与胚胎发育、肿瘤侵袭转移密切相关，而EMT与耐药的关系及机制尚不明确。我们课题组通过前期中国南方人群肺癌细胞建系计划，成功建立一株原发耐药的肺腺癌细胞系Am1010，我们发现该细胞同时具有EMT的特征，是研究EMT与耐药关系的良好模型。据此，我们设想利用该细胞和其他非小细胞肺癌细胞系统性地研究多种化疗药物与EMT表型之间的关系及其分子机理。通过前期初步的工作，我们发现肺癌细胞EMT表型与吉西他滨耐药性相关。本课题计划利用多种肺癌细胞系进一步确定EMT与吉西他滨耐药之间的关系，进而利用分子生物学、蛋白质组和动物模型等方法研究肺癌细胞中EMT参与调节吉西他滨耐药性的转录因子、靶基因及其调控机制，并在肺癌临床标本中检测EMT相关因子与吉西他滨疗效的关系，探讨EMT相关因子作为吉西他滨疗效预测因子的可能性。

上皮间质转化（Epithelial mesenchymal transition, EMT）是指有极性的上皮细胞转变成为具有运动、侵袭能力的间质细胞的在进化上较为保守的过程，该过程与胚胎发育、肿瘤侵袭转移密切相关，而EMT与耐药的关系及机制尚不明确。本研究通过筛选一系列肺癌细胞系的上皮细胞标志和间质细胞标志，大致可以将他们分为上皮细胞和间质细胞，其中我们发现前期中国南方人群肺癌细胞建系计划，成功建立一株原发耐药的肺腺癌细胞系Am1010具有非常典型的间质细胞的形态和分子表型。进而检测这些肿瘤细胞对药物的敏感性时发现，具有间质细胞形态的细胞对化疗药物如吉西他滨、顺铂和紫杉醇不敏感，而具有上皮细胞表型的细胞对化疗药物较为敏感。在此基础上，我们利用siRNA技术特异性地沉默EMT转录调控因子ZEB1和ZEB2后发现，沉默ZEB1和ZEB2的表达可以增强Am1010对吉西他滨的敏感性。另外通过比较上皮细胞和间质细胞基因表达谱，我们发现一系列编码叉头蛋白表达的基因呈现差异表达，我们进而研究叉头蛋白家族成员FOXP1和FOXM1在TGF诱导EMT过程中的变化及其与肺癌转移的关系。我们发现，TGF可以上调FOXP1的表达，下调FOXM1的表达。通过比较肿瘤组织及对应的正常组织mRNA表达水平，我们发现FOXP1在肿瘤组织中低表达，而FOXM1在肿瘤组织中高表达。为了了解FOXP1和FOXM1与肺癌转移之间的关系，我们进一步利用免疫组化的方法检测III期肺癌患者原发灶及对应淋巴结转移灶中FOXP1和FOXM1的表达，结果表明，原发灶和转移灶的FOXP1和FOXM1表达无差异，且紧密关联Kaplan-meiyer生存分析表明原发灶FOXP1和FOXM1高表达组累积生存率高于低表达组，而转移灶FOXP1和FOXM1高表达组和低表达组生存率无统计学差异，但进一步的Cox回归分析并未发现FOXP1和FOXM1是独立的预后因子。这些结果提示，尽管FOXP1和FOXM1受到TGF调控，以前数据也提示FOXM1促进EMT，但我们的数据提示他们的表达在转移过程并未发生变化。