胃癌转移相关MicroRNA的鉴定及其对RECK、MMPs基因表达的影响

用miRNA基因芯片、RT-PCR、Northern blot分析不同分化程度的人胃癌细胞株MGC-803、MKN-45、AGS及MKN－28与正常胃黏膜上皮细胞GES－1相比，miRNA表达水平的变化；设计相关的抗miRNA的反义寡核苷酸（下调miRNA）和构建miRNA表达载体（上调miRNA），改变人胃癌细胞株中相关miRNA簇表达水平， MTT法分析各胃癌细胞株生长活性的变化；用RT-PCR、Western blot分析靶侵袭转移因子（RECK、MMP-2、MMP-9） mRNA和蛋白表达水平的变化，Trans-well小室法和划痕试验检测细胞侵袭力和迁移力变化。本项目通过研究miRNA 、靶侵袭因子与肿瘤的关系，进一步阐明miRNA调控细胞的作用机制，揭示胃癌细胞生长的机制。

1.不同分化程度的人胃癌细胞株与正常的胃粘膜细胞miRNA表达谱（包括病毒相关miRNA）具有明显差异，而且这种差异经丝裂霉素作用后发生显著改变。.2.以miR-7为代表，探讨了胃癌中下调的miRNA对胃癌的影响及作用机制，我们发现miR-7在胃癌细胞及组织中均低表达，而且miR-7表达水平与胃癌分化程度相关，体外细胞实验表明上调miR-7的表达水平可以抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力，生物信息学预测miR-7与靶基因EGFR存在互补序列，miR-7可以抑制靶基因EGFR的基因转录和蛋白表达水平。另外，我们在体内动物实验上发现，上调miR-7表达水平可以抑制裸鼠人胃癌种植瘤的生长和改善种植瘤组织的病理学特征，同样miR-7可以抑制种植瘤组织靶基因EGFR的基因转录和蛋白表达水平。.3.以miR-374b-5p为代表，探讨了胃癌中上调的miRNA对胃癌的影响及作用机制，我们发现miR-374b-5p在胃癌细胞中高表达，体外细胞实验表明下调miR-374b-5p表达水平可抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力，生物信息学预测miR-374b-5p与靶基因RECK存在互补序列，miR-374b-5p可以抑制靶基因RECK的基因转录和蛋白表达水平。另外，我们在体内动物实验上发现，下调miR-374b-5p表达水平可以抑制裸鼠人胃癌种植瘤的生长和改善种植瘤组织的病理学特征，同样miR-374b-5p可以抑制种植瘤组织靶基因RECK的基因转录和蛋白表达水平。