灯盏细辛对青光眼大鼠视网膜Müller细胞Kir通道调控及视神经保护机制研究

Glaucoma is the first cause leading to irreversible blindness in the world.Although its pathogenesis is RGCs，Müller cells gliosis were given more attention in the pathogenesis. Müller cells gliosis affect RGCs apoptosis by release of neurotrophic factor and neurotoxic cytokines，Our previous studies found that it is significance for RGCs apoptosis that Müller cells Kir channel affect K+ channel of RGCs.It is worth us to explore that Erigeron breviscapus how to modulate Müller cells Kir channel which affect K+ channel of RGCs and to affect RGCs apoptosis.In this research，We will study the expression and distribution of proteins such as Kir channel、PEDF、TNF-ɑ、NOS,optic nerve damage、K+ cureents of RGCs、RGCs apoptosis and changement of Kir currents in Müller cells in rat glaucoma model and Erigeron breviscapus treated glaucoma rat。we will take techniques of RNAi、immunochemistry、western blot、RT-PCR、whole-cell patch-clamp、TUNEL and some ophthalmologic examination.This research will elucidate the relationship between Müller and RGCs apoptosis in glaucoma， illustrate the molecular mechanism of protective effects of Erigeron breviscapus，provide a new direction of glaucoma therapy。

青光眼是全球首位不可逆致盲性眼病，病理基础是神经节细胞凋亡，Müller细胞胶质化释放神经营养因子和有害因子影响RGCs存亡，前期研究发现，Müller细胞Kir通道对RGCs钾通道的影响对RGCs存亡更有重要意义。灯盏细辛如何对Müller细胞Kir通道进行调控而影响RGCs钾通道从而影响RGCs凋亡值得我们探索。本研究拟采用RNA干扰技术、免疫荧光组织化学技术、RT-PCR技术、Western Blot 技术、膜片钳技术、TUNEL技术，观察灯盏细辛对青光眼大鼠Müller细胞Kir通道及相关蛋白的表达及分布情况，观察视神经损伤，RGCs钾通道电流及RGCs凋亡情况，揭示Müller细胞Kir通道在青光眼疾病中与RGCs凋亡的关系，从离子通道角度探索灯盏细辛保护视神经的机理，为治疗青光眼视神经疾病提供新思路。

青光眼是重要的致盲性眼病，在疾病发生发展过程中，Müller细胞激活是其表现之一。Müller细胞是视网膜中的胶质细胞，对视网膜内环境的调节和RGCs的功能起到重要的调节作用。本研究结果显示加压使培养的Müller细胞GFAP表达增加，Kir4.1表达降低，通道电流降低，RGCs胞内K+浓度降低，外向电流增加，Müller细胞对细胞外K+调节能力丧失，引起内环境稳态的改变；其次CNTF有短暂的升高而后降低，TNFɑ升高,灯盏细辛能翻转CNTF降低，延缓TNFɑ升高，灯盏细辛通过作用于Müller细胞能更好地促进RGCs的存活。在慢性高眼压动物模型中也发现在疾病发展过程中Müller细胞激活，Kir4.1表达降低，炎性因子TNFɑ、IL-1β升高，神经营养因子CNTF、PEDF先升高后降低，灯盏细辛对此有翻转作用。慢性高眼压大鼠动物模型成功后，向玻璃体内注射Bacl2阻断Kir4.1通道，观察高眼压大鼠动物Müller细胞激活情况，发现GFAP表达增加，炎性因子TNFɑ表达，视网膜、神经纤维层变薄，RGCs减少，灯盏花乙素对有翻转作用。本研究说在明青光眼疾病发生过程中，RGCs的凋亡与Müller细胞Kir4.1通道和TNF-ɑ有关，灯盏细辛对视网膜RGCs的保护作用与此过程有关；灯盏细辛能促进视网膜中神经营养因子的分泌减少炎性因子分泌。本研究从离子通道的角度研究视神经的保护机制，为中药保护视神经提供新的研究思路。