益肾胶囊调节SOCS3干预糖尿病肾病足细胞损伤的分子机制

终末期肾脏病最主要的病因之一是糖尿病肾病（DN）。足细胞损伤在DN发生发展中起重要作用。课题组在2006年国家自然基金资助下，发现益肾胶囊可减轻DN足细胞损伤。有研究表明，JAK/STAT信号通路的激活参与了DN进展，且足细胞中可检测到JAK2的表达。细胞因子抑制因子（SOCS3）可通过抑制JAK/STAT信号通路减轻DN肾小球系膜细胞增殖、肾小管上皮细胞的转分化，延缓DN进展。本项目结合前期工作基础，提出"益肾胶囊治疗糖尿病肾病足细胞损伤可能与调节SOCS3与JAK/STAT细胞因子信号转导有关"的假说。采用SOCS3正义基因及siRNA转染足细胞，观察益肾胶囊含药血清干预后，足细胞相关蛋白、SOCS3、JAK/STAT信号蛋白的表达及其相互作用的关系；并利用DN大鼠模型，动态观察益肾胶囊对足细胞和信号转导中基因及蛋白表达的影响。揭示益肾胶囊上调SOCS3，保护DN足细胞损伤的分子机制。

一、项目背景：糖尿病肾病的发病机制复杂，是多种因素综合作用的结果，已经证实足细胞病变在DN发生过程中起了重要的作用。研究发现足细胞损伤参与DN蛋白尿发生，认为足细胞是糖尿病肾病蛋白尿发生与进展的中心靶点。SOCS是近年发现的细胞因子的负调控因子，调控众多细胞因子和激素的信号转导。研究发现JAK/STAT信号通路参与DN的发病过程，是高血糖引起肾脏损害的主要机制之一。二、研究内容:1.建立DN大鼠模型，分为正常组（N）、糖尿病肾病组（DN）、益肾胶囊组（DN+Y）、氯沙坦钾组（DN+L）。检测血糖、24h尿蛋白定量、BUN、Scr，及肾组织SOCS3、p-JAK2、p-STAT3、α-SMA、FN、TGF-β、TLR4及NF-KB表达。2.培养足细胞、肾小管上皮细胞，分为正常组（N），高糖组(H)，等渗组(M)，益肾胶囊高、中、低剂量组（H+YH、H+YM、H+YL），氯沙坦钾组（H+L）。检测nephrin、podocin、α-SMA、SOCS3及TGF-β表达。三、研究结果：(1)DN组大鼠血糖、24h尿蛋白定量、BUN、Scr均较N组明显升高；治疗组较DN组低（P＜0.05）。（2）DN组肾小球代偿性肥大，系膜细胞增生，系膜区明显增宽，炎症细胞浸润，肾间质水肿，肾小管损伤，而治疗组上述改变减轻。（3）SOCS3、p-JAK2、p-STAT3、α-SMA、FN、TGF-β、TLR4及NF-KB在N组大鼠肾组织少量表达，DN组表达增多（P＜0.05），SOCS3治疗组表达较DN组增多，p-JAK2、p-STAT3、α-SMA、FN、TGF-β、TLR4及NF-KB在治疗组表达较DN组降低（P＜0.05）。（4）N组足细胞有nephrin、podocin蛋白的表达，α-SMA少量表达，H组nephrin、podocin表达降低（P<0．05)，α-SMA表达增多（P<0．05)，治疗组nephrin、podocin表达较H组增多，治疗组α-SMA表达下降（P<0．05)。（5）正常大鼠肾小管上皮细胞有微量SOCS3表达，高糖刺激后表达升高 (P<0．05)，治疗组表达较H组增多(P<0．05)。H组TGF-β表达较N组增多，治疗组下降(P<0．05)。四、科学意义：益肾胶囊可能通过调节JAK/STAT/SOCS表达，维持足细胞功能，从而保护肾脏，延缓糖尿病肾病进展。