Myh14 基因功能的研究和人DFNA4耳聋疾病动物模型的建立

目前，超过50%的遗传性耳聋病例是由于单基因突变引起的，包括肌球蛋白、连接蛋白、转录因子、离子通道或其他细胞组成。不同肌球蛋白超家族的成员以常染色体显性或隐性性状传播综合征与非综合征性耳聋。Myh14基因是肌球蛋白超家族的成员之一，研究证明Myh14基因能引起常染色体显性耳聋4（DFNA4），但致聋机理未知，Myh14基因在听力中的功能仍不清楚。因此为解决这些问题，我们拟采用基因打靶技术，通过构建Myh14条件基因敲除载体，转染胚胎干细胞（ES细胞），再进行显微注射制作小鼠，再结合相应组织特异性的Cre小鼠，制作能在特定组织（(耳蜗) 敲除 Myh14基因的小鼠，此小鼠也是人DFNA4耳聋疾病的动物模型；然后对获得的Myh14基因敲除的小鼠进行一系列听觉分析，探究Myh14基因在听力中的功能，并阐明Myh14基因突变致聋的相关机理。

超过50%的遗传性耳聋病例是由于单基因突变引起的，包括肌球蛋白、连接蛋白、转录因子、 离子通道或其他细胞组成。不同肌球蛋白超家族的成员以常染色体显性或隐性性状传播综合征与非综合征性耳聋。Myh14 基因是肌球蛋白超家族的成员之一，研究证明 Myh14 基因能引起常染色体显性耳 聋 4（DFNA4），但致聋机理未知，Myh14 基因在听力中的功能仍不清楚。因此为解决这些问题，我们采用基因打靶技术，制作Myh14 条件基因敲除小鼠。我们构建了基因打靶载体。长PCR法筛选出 3个发生了正确同源重组的ES 细胞克隆。把经过筛选的 ES 细胞利用显微注射注入 C57/B6 小鼠的囊胚中，获得高嵌合小鼠。 高嵌合小鼠与C57/B6小鼠交配获得F1代 floxed 小鼠。Floxed 小鼠与组织特异性的 Cre 小鼠，制作出了在特定组织（耳蜗) 敲除 Myh14 基因的小鼠。使用石蜡切片进行形态学分析，显示基因敲除小鼠与野生小鼠一样整个柯蒂氏器形态没有明显变化，毛细胞形态完整。使用电生理仪对突变模型鼠进行分析，基因敲除小鼠耳蜗功能有所变化。我们制作的基因敲除小鼠是人 DFNA4 耳聋疾病的动物模型。