电针结合运动疗法干预脊髓损伤大鼠轴突再生的Rho/ROCK信号传导机制研究

本项目采用改良的Allen重物坠落WD法制备大鼠急性脊髓损伤模型，随机分为对照组、模型组、电针治疗组、电针结合运动疗法治疗组和Rho激酶抑制剂治疗组。观察不同时间点脊髓损伤大鼠BBB评分判断肢体功能恢复情况；采用髓鞘染色和BDA-R顺行示踪探讨治疗后神经轴突生长和髓鞘修复情况；采用CBHRP逆行示踪技术标记方法观察红核脊髓束的逆行性损伤变化；通过GST Pull down assay－RhoA蛋白活性测定和MLC磷酸化水平及Rho/ROCK激酶信号通路的关键蛋白（RhoA、Nogo-A，OMgp，NGR， GAP-43，Cdc42）的表达变化，探讨电针结合运动疗法干预脊髓损伤后Rho/ROCK激酶信号通路上下游底物的表达变化，进而促进神经元轴突再生。.研究电针结合运动疗法可能干预脊髓损伤大鼠上行及下行的皮质脊髓的生长能力，从新的角度揭示针灸的"经络-脏腑相关"理论。

中枢神经系统损伤微环境中所有抑制轴突生长的抑制分子通过各自特殊的信号途径,最终均汇聚到共同的细胞内信号分子RhoA，通过激活Rho/ROCK发挥其突起生长抑制作用。本研究通过动物实验观察了电针结合运动疗法治疗脊髓损伤Rho/ROCK激酶信号通路的关键蛋白的表达关系。结果发现，在7天、14天、28天三个时间点，电针结合运动疗法组的关键蛋白NogoA、GAP43、cdc42、p-MLC的表达明显上调，NgR和RhoA表达受抑制，与Rho激酶抑制剂的作用趋势抑制，对Rho/ROCK通路起到正性调节作用。此外，电针结合运动疗法组髓鞘染色平均IOD值在7天、14天、28天三个时间点，优于单纯电针组和模型组。这些研究结果提示，电针结合运动疗法很可能通过调节Rho/Rock激酶信号通路关键蛋白的表达来促进脊髓损伤后轴突再生。