新型抗炎蛋白TIPE2调控巨噬细胞功能抗动脉粥样硬化的机制研究

TIPE2是2008年发现的负调控固有免疫和适应性免疫的新型抗炎蛋白。课题组首次研究发现，TIPE2基因缺失小鼠易于诱导动脉粥样斑块形成，该过程中巨噬细胞对ox-LDL氧化应激的敏感度增高，表现为活性氧H2O2及氧化酶NAPDH亚基p47phox的水平显著升高，而抗氧化酶HO-1、NQ-O1、ecSOD的表达显著下调。由此提出本课题假说：TIPE2是抗动脉粥样硬化的重要新基因，其机制与巨噬细胞功能有关。为此，本课题利用TIPE2敲基因鼠、LDLr敲基因鼠、细胞模型，以骨髓移植实验验证TIPE2的抗动脉粥样硬化作用，以TIPE2敲基因鼠的巨噬细胞为细胞模型，与C57BL/6鼠来源的巨噬细胞对照，研究TIPE2调控巨噬细胞功能的核心环节，明确TIPE2调控巨噬细胞信号通路的关键分子或关键位点，以期揭示TIPE2抗动脉粥样硬化的分子机制，为临床阻断或预防动脉硬化的发生提供新靶点。

包括巨噬细胞在内的免疫细胞介导的炎症反应在动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)发生发展中的作用越来越受到重视。TIPE2，肿瘤坏死因子诱导的蛋白8-2 (Tumor necrosis factor- induced protein-8-like 2)，是新近发现的新型免疫分子，通过负调控固有免疫和特异性免疫维持免疫稳态。但TIPE2在AS斑块形成中可能功能未明，为此，本课题以炎症为切入点，利用TIPE2-/-小鼠、LDLr-/-鼠、ApoE-/-鼠等多种实验动物模型研究TIPE2在AS斑块形成中的作用，并分离培养TIPE2-/-与C57BL/6小鼠原代巨噬细胞为靶细胞，real-time PCR、western blot、FCM等多种方法对比研究ox-LDL刺激后细胞的吞噬功能和泡沫细胞形成能力、分泌炎症因子及对氧化应激反应的差异，western blot探讨TIPE2调控巨噬细胞功能的信号通路的关键分子。结果发现，急性冠脉综合征患者外周血单个核细胞表达TIPE2较正常人增高，TIPE2-/-小鼠易于诱导动脉粥样斑块形成，骨髓移植试验验证了TIPE2具有抗动脉粥样硬化形成作用，TIPE2抑制oxLDL诱导的氧化应激，抑制巨噬细胞分子NO、炎症因子，促进活化诱导的细胞死亡，此外，TIPE2能够抑制NF-kappa B和MAPK信号通路。研究结果提示：新型抗炎蛋白TIPE2具有抗动脉粥样硬化形成作用，是通过调控巨噬细胞的氧化应激、NO的分泌、促炎性和趋化性细胞因子的分泌以及活化诱导的细胞凋亡等功能发挥抗AS效应的，并与负性调节巨噬细胞的NF-kappa B和MAPK信号通路的活化有关。.本课题的创新点及意义在于，①在国际上首次研究新型抗炎蛋白TIPE2与动脉粥样硬化的关系，属原创性研究；②获得理论突破：分析研究结果提出新型调节分子TIPE2是抗动脉粥样硬化关键新基因的论断；③进一步阐明了动脉粥样硬化发生的炎症免疫机制，为免疫干预动脉粥样硬化的临床治疗提供了新的靶点。.研究成果：①发表SCI收录论文4篇；②参加国际学术会议交流1次，并作动脉粥样硬化分会场报告；②为国家培养优秀的科技人才：培养与此课题研究相关的毕业硕士生3名，未毕业博士生2名，未毕业硕士生1名；④研究成果申请国家发明专利2项。