猪瘟野毒株与兔化弱毒疫苗株的多重环介导等温扩增-核酸免疫试纸鉴别检测

针对猪瘟病毒(CSFV)野毒感染与疫苗免疫鉴别诊断的关键问题，在分析CSFV全基因组序列的基础上，设计筛选CSFV野毒和疫苗株的特异性环介导等温扩增(LAMP)引物，以生物素(biotin)、荧光素(FITC)/地高辛(DIG)标记环引物(LF/LB)，分别建立CSFV野毒和疫苗株RT-LAMP检测方法；利用亲和素(avidin)和抗FITC和DIG单克隆抗体建立CSFV的RT-LAMP-核酸免疫试纸检测方法；通过筛选CSFV野毒株和疫苗株的最佳LAMP引物配对，系统优化RT-LAMP反应体系和反应条件，建立CSFV野毒株和疫苗株的多重RT-LAMP扩增方法，并研制检测LAMP扩增产物的多联核酸免疫试纸，建立CSFV野毒株与兔化弱毒疫苗株的多重RT-LAMP-核酸免疫试纸鉴别检测方法，为我国猪瘟防控与净化提供技术支撑，对动物疫病多重感染的鉴别检测有重要意义。

本项目研究发现了环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)的缺陷，并提出了合理有效的改进措施；系统分析了猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)全基因组序列，采用PrimerExplorer 4 和 Oligo 7软件设计筛选了CSFV野毒和疫苗株的特异性LAMP引物，以生物素（Biotin）、荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记LAMP引物，分别建立了CSFV野毒和疫苗株RT-LAMP-核酸免疫试纸检测方法；筛选确定了CSFV野毒和疫苗株的最佳LAMP引物配对，优化了RT-LAMP反应体系和反应条件，建立了CSFV野毒株和疫苗株的多重RT-LAMP扩增方法，并研制了检测LAMP扩增产物的多联核酸免疫试纸，建立了CSFV野毒株和疫苗株的多重RT-LAMP-核酸免疫试纸鉴别检测方法。该项目研究成果为我国CSFV野毒株和疫苗株鉴别诊断提供了技术支撑，对动物疫病多重感染的鉴别检测有重要意义。