基于肠道微生态的星蒌承气汤治疗急性脑梗死痰热腑实证机制研究

Xinglou Chengqi Decoction is a recipe for the treatment of stroke with the syndrome of phlegm-heat and fu-organ excess, whose clinical efficacy was exactly and effective. However, the study of the therapeutic mechanism of Xinglou Chengqi Decoction was not deep enough. This project assumes that part of the mechanism of Xinglou Chengqi Decoction in the treatment of stroke with the syndrome of phlegm-heat and fu-organ excess is achieved by changing the intestinal microecology. Therefore, this study focused on intestinal microecology, based on experimental and clinical research basis ,that the intestinal flora - intestinal - brain axis interact with each other by three ways of immune, neuroendocrine and vagus nerve, the effect of Xinglou Chengqi Decoction on the model of stroke induced by sputum and heat and the effect of Xiongluo Chengqi Decoction on the MCAO reperfusion of sterile mice were studied, with the observation indicators including Cephalosporin, brain tissue and blood Treg cells and IL-17 + γδT distribution percentage, plasma brain-gut peptide, motilin, dopamine and cecal norepinephrine concentration, tyrosine hydroxylase density distribution, and intestinal flora structure, cerebral infarction area and neurological function score, so as to clarify the intestinal microecological mechanism of Xinglou Chengqi Decoction to improve the prognosis of stroke.

星蒌承气汤是治疗中风病痰热腑实证的代表方剂，临床疗效确切，但是对于星蒌承气汤“化痰通腑”的疗效机制研究不够深入。本项目提出:星蒌承气汤治疗中风病痰热腑实证的部分作用机制是通过改变肠道微生态而实现的。本研究着眼于肠道微生态，基于肠道菌群-肠-脑轴以免疫、神经内分泌及迷走神经三个途径相互影响的研究基础，设计星蒌承气汤对中风痰热腑实证小鼠模型的影响和耐星蒌承气汤肠道菌群移植对无菌小鼠MCAO再灌注的影响两个实验，以影响菌-肠-脑轴的免疫（盲肠、脑膜、脑组织及血液Treg细胞及IL-17 +γδT的分布百分比）、神经内分泌（血浆脑肠肽胃动素、胃泌素、多巴胺）及迷走神经（盲肠去甲肾上腺素浓度、酪氨酸羟化酶密度分布），以及肠道菌群结构、脑梗死面积及神经功能评分为观测指标，综合阐释星蒌承气汤“化痰通腑”改善脑卒中预后的肠道微生态机制。

本课题基于肠道菌群-肠-脑轴，开展“化痰通腑法”代表方剂——星蒌承气汤中风脑保护的机制研究。选用高脂饲料喂养的普通C57BL6小鼠MCAO模型及多种抗生素消除肠菌后的C57BL6伪无菌小鼠MCAO模型，以尼莫地平为阳性对照，以聚乙二醇为阴性对照，采集术后3天的实验指标，包括：1.盲肠段肠道菌群分类、短链脂肪酸检测；2.盲肠交感神经活性测验：盲肠去甲肾上腺素（noradrenaline）浓度、酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase）分布；3.神经内分泌指标：血浆脑肠肽（胃动素）；4.免疫途径指标：盲肠及血液Treg细胞及IL-17 +γδT的分布百分比，脑IBA-1及GFAP、血清炎症因子；5.组织及行为学指标：脑梗死面积及神经功能测定。探讨星蒌承气汤治疗中风痰热腑实证“通腑”与“通便”差异的肠道微生态机制；观察星蒌承气汤对伪无菌小鼠小鼠急性脑梗死模型菌-肠-脑轴的影响，验证星蒌承气汤通过直接影响肠道菌群变化而改善脑卒中预后的作用机制。本课题完成了原计划的研究内容，研究表明星蒌承气汤可以显著减少脑梗死面积，改善中风小鼠的神经功能评分，而对于伪无菌鼠中风模型则未发现星蒌承气汤表现出相同的中风脑保护效应，说明星蒌承气汤中风脑保护的部分机制是通过改善肠道微生态来完成的。其具体机制包括提高肠道内容物短链脂肪酸，尤其是丁酸的含量，增强肠道短链脂肪酸受体GPR43表达，调节肠黏膜免疫反应（上调Treg，下调IL-17+γδT等），增加血液IL10、减少TNF等炎性因子及脑肠肽胃动素水平，最终减少梗死区域胶质细胞活化和神经细胞凋亡，从而达到中风脑保护的作用。本研究成果对中风病的临床治疗具有重要的指导意义——对于中风后便秘患者，仅仅“通便”治疗是不够的，需要结合患者的证候特点进行中医药“化痰通腑”治疗，才能取得好的临床效果。