基于在线固相萃取同时测定4种真菌毒素新方法的建立及食管癌高发区暴露评估与危害度分级研究

Mycotoxins has become one of the hot food security issues of international concern. Previous studies of single mycotoxins toxicity and toxicological mechanisms more variety of mycotoxins synergies harm less. In the previous study food ochratoxin A was detected in Hebei Province high incidence of esophageal and the effect of proliferation and apoptosis in human esophageal squamous epithelial cells, human peripheral blood mononuclear cells, immortalized human renal tubular epithelial cells and A-549 cell by our group, but few reports on simultaneous detection of a variety of fungal toxins in the food of the region and its human esophageal squamous cell synergies.The subject line solid phase extraction on the basis of the preliminary work to establish simultaneous determination of ochratoxin A, aflatoxin G1, fumonicin and sterigmatocystin new method and the high incidence of esophageal exposure assessment, and then study the four kinds of mycotoxins in human esophageal squamous cell proliferation and apoptosis collaboration evaluation role and harm. Create multiple mycotoxins new method for the simultaneous determination of the exposure assessment to provide technical support, clarify mycotoxins in human esophageal squamous cell harm and damage mechanisms provide a theoretical basis for the prevention and treatment of esophageal cancer.

真菌毒素污染已成为国际关注的热点食品安全问题之一。以往研究单一真菌毒素检测、暴露评估及毒理学机制较多，而多种真菌毒素同时检测的暴漏评估和协同作用及其危害度研究较少。本课题组在前期研究中分别检测了河北省食管癌高发区粮食中赭曲霉毒素A及其对人食管鳞状上皮细胞、人外周血单个核细胞、永生化人肾小管上皮细胞、A-549细胞的增殖和凋亡作用，但有关同时检测该地区粮食中多种真菌毒素及其对人食管鳞状上皮细胞的协同作用报道较少。本课题在前期工作基础上建立在线固相萃取同时测定4种真菌毒素新方法并对食管癌高发区进行暴露评估，进而研究4种真菌毒素对人食管鳞状上皮细胞在增殖和凋亡的协同作用及危害度评价。建立多种真菌毒素同时测定新方法对暴露评估提供技术支持，阐明真菌毒素对人食管鳞状上皮细胞的危害度及损伤机制对食管癌的防治提供理论依据。

粮食常常同时受到多种霉菌毒素污染，真菌毒素的联合毒性作用对人体健康构成严重威胁，已成为国际关注的热点食品安全问题之一。然而目前多种真菌毒素同时检测的暴露评估和联合作用及其危害度研究较少。本项目在前期工作基础上，采用固相萃取-在线衍生-高效液相色谱法建立了同时测定4种真菌毒素，即黄曲霉毒素G1（AFG1）、杂色曲霉毒素（ST）、赭曲霉毒素（OTA）和伏马菌素B1（FB1））的新方法。使用QuEChERS盐包同时提取食管癌高发区粮食样品中4种真菌毒素，提取液经PRiME HLB固相萃取小柱净化后进入串联DAD和FLD检测器的ThermoU3000液相色谱系统进行分析，完成粮食样品测定方法的建立，并通过样品检测达到课题设计要求。通过实验室细胞实验，采用CCK-8法评价4种真菌毒素对BRL的细胞毒性。通过绘制剂量-效应曲线及运用Design-Expert 8.0.6软件运行中心组合设计等方法，明确了4种真菌毒素对BRL的联合毒性作用，表明OTA和FB1对BRL的毒性表现为协同效应。随后通过Hochest 33258、流式细胞术等技术测试反映细胞凋亡有关指标，探明2种毒素间可能的联合毒性作用机理。为进一步探索干预措施，我们开展了一项934名肿瘤患者营养状况调查的多中心研究。结果表明PG-SGA更适合于筛选癌症患者营养不良风险。恶性肿瘤患者营养不良发生率较高，而营养支持率相对较低，应在围手术期及放化疗期间给予合理的营养支持。恶性肿瘤患者的食欲可大为减退，而Orexin A具有调节摄食和能量平衡的功能，可增加肿瘤患者的摄食量、提高其体重。项目组研究发现肺癌、胃癌和结/直肠癌患者血清Orexin A水平与年龄、血糖和BMI之间呈负相关性；血清Orexin A水平与总蛋白、白蛋白和血红蛋白等指标不存在相关性。此外，我们回顾性分析食欲素与恶性肿瘤相关文献，结果表明利用Orexin及OX1R在细胞凋亡方面的作用，可以开发研制Orexin抗体和OX1R靶向激动剂诱导人类各种癌细胞的凋亡，其在肿瘤治疗等方面应用前景广泛。本项目的完成对粮食中真菌毒素的暴露评估提供技术支持，阐明真菌毒素对BRL细胞的危害度及损伤机制对肝癌的防治提供理论依据。