健脾渗湿方对痛风尿酸盐转运蛋白的调控作用研究

痛风（Gout）是临床常见病、多发病，且已成为识别代谢综合征的早期标志。最新研究表明原发性痛风及高尿酸血症（HUM）主要是由于近端肾小管尿酸盐转运蛋白异常所致，故对尿酸盐转运蛋白的调控作用机制研究具有重要意义。本研究在既往研究的基础上，提出健脾渗湿方通过对尿酸盐转运蛋白的调控作用而发挥抗Gout及HUM作用的科学假说，拟通过HK-2细胞培养及建立高尿酸血症大鼠模型，采用PCR、Western blot、免疫组化技术，观察健脾渗湿方对尿酸盐转运蛋白UAT、URAT1、OAT1、OAT3基因及蛋白表达的影响，探讨健脾渗湿方治疗Gout及HUM的分子机制，为健脾渗湿方治疗Gout及HUM 提供理论依据，丰富中医药防治Gout理论。

目的：探讨健脾渗湿方对高尿酸血症大鼠模型肾小管上皮细胞和体外培养HK-2细胞尿酸盐转运蛋白（UAT、URAT1 、OAT1及OAT3）的调控作用，揭示其治疗痛风及高尿酸血症作用的部分分子机制，为健脾渗湿方治疗痛风提供理论依据，丰富中医防治痛风理论。.方法：1.48只SD大鼠按尿酸水平平均分为正常对照组、模型组、阳性药苯溴马隆组、健脾渗湿方低中高三个剂量组。采用酵母饲料加腺嘌呤构建高尿酸血症大鼠模型，灌胃给药14天后，检测各组大鼠血UA、Cr和Bun水平，计算肾肝脾脏器指数，石蜡切片HE染色观察实验大鼠肾脏病理损伤程度，免疫组化检测大鼠肾小管上皮细胞尿酸盐转运蛋白表达情况。2.HK-2细胞体外培养，以不同浓度健脾渗湿方含药大鼠血清和生理盐水血清干预后，采用RT-PCR及Western blot 法分别检测HK-2细胞尿酸盐转运蛋白mRNA及蛋白的表达情况。.结果：1.健脾渗湿方低中高3个剂量组不仅能显著降低高尿酸血症大鼠模型血UA水平（P<0.05），而且对Bun和sCr水平具有显著的下调作用（P<0.05，P<0.01），且未出现阳性药苯溴马隆所导致的肝损伤；健脾渗湿方高剂量组能减少高尿酸血症大鼠模型肾小管及间质部位尿酸盐结晶沉积和炎性细胞浸润，能上调大鼠模型肾小管上皮细胞OAT3蛋白的表达，下调URAT1蛋白的表达，但对UAT、OAT1蛋白表达无明显影响。.2.对体外培养的HK-2细胞，与相同浓度生理盐水血清组比较，5%健脾渗湿方含药血清能上调hUAT mRNA表达水平，10%健脾渗湿方含药血清能显著下调hURAT1 mRNA表达水平，而不同浓度健脾渗湿方含药血清对hOAT1、hOAT3 mRNA表达无明显差异；5%、10%健渗湿方含药血清能显著上调hUAT蛋白表达，下调hURAT1蛋白表达，而不同浓度健脾渗湿方含药血清对hOAT1、hOAT3蛋白表达无明显差异。.结论：1.健脾渗湿方具有显著降低高尿酸血症大鼠模型血UA水平，且对肾功能损伤有保护作用，值得进一步研究和开发利用。2.健脾渗湿方能调控大鼠模型肾小管URAT1、OAT3蛋白的表达。3.健脾渗湿方能调控体外培养的HK-2细胞hUAT、hURAT1mRNA及蛋白的表达。4.肾小管尿酸盐转运蛋白UAT、OAT3的表达上调，URAT1的表达下调可能是健脾渗湿方有效治疗痛风及高尿酸血症的作用机制之一。