细胞周期调控因子CKs1、CKs2在肝细胞癌细胞增殖与凋亡调控中的机理

P27是控制细胞增殖和死亡的"双向开关"，P27降解可抑制细胞凋亡，而 Cks1是P27蛋白泛素化降解主要途径中必需的成分。我们已观察到肝细胞癌组织中Cks1,2基因和蛋白表达水平高于癌旁组织和正常肝组织，且Cks1,2表达水平与P27呈负相关，提示CKs1、CKs2很可能与肝细胞癌细胞周期调控和增殖有关。但是，CKs1及CKs2在肿瘤发生发展中的作用机制尚未探明，在肝细胞癌细胞增殖和分化中的作用未见报道。本研究拟采用基因转染、SiRNA干扰、基因敲除小鼠实验等技术，重点研究CKs1、CKs2基因和蛋白对肝细胞癌细胞增殖、凋亡的影响及其在细胞周期中的消长变化规律；进一步分析CKs1、CKs2和P27基因及蛋白变化与临床病理特征、肿瘤细胞周期参数、肿瘤转移、复发和预后的相关性。为肝细胞癌致病机理、临床治疗研究提供新的线索和理论依据，为肝细胞癌基因和单抗治疗寻找新的可能靶点提供实验依据。

p27是控制细胞增殖和死亡的“双向开关”，p27降解可抑制细胞凋亡，而 Cks1是p27蛋白泛素化降解主要途径中必需的成分。我们已观察到肝细胞癌组织中Cks1,2基因和蛋白表达水平高于癌旁组织和正常肝组织，且Cks1,2表达水平与p27呈负相关，提示Cks1、Cks2很可能与肝细胞癌细胞周期调控和增殖有关。.但是，Cks1及Cks2在肿瘤发生发展中的作用机制尚未探明，在肝细胞癌细胞增殖和分化中的作用未见报道。本研究采用基因转染、SiRNA干扰等技术，重点研究Cks1、Cks2基因和蛋白对肝细胞癌细胞增殖、凋亡的影响及其在细胞周期中的消长变化规律以及Cks1、Cks2基因表达与p27泛素化的关系。由于Akt在细胞生存和凋亡中扮演重要角色，以磷酸化形式执行功能，能够通过抑制凋亡来促进细胞存活，调节失活的GSK-3β进而调节糖原的合成，阻止GSK-3β介导的cyclinD的磷酸化和降解来调节细胞周期，在细胞增殖调节中发挥重要作用，因此我们进一步研究Cks1、Cks2 蛋白表达的变化对Akt、GSK-3β的影响。在动物实验方面，我们委托德克萨斯州农工大学健康科学中心分别构建Cks1和Cks2基因敲除的小鼠，进而用二乙基亚硝胺（DEN）分别诱导Cks1和Cks2基因敲除小鼠以及正常对照小鼠，建立小鼠的肝癌模型。.我们的结果表明Cks1,2蛋白通过促进p27蛋白的泛素化从而降低其蛋白水平; Cks1,2蛋白具有促进细胞增殖和抑制细胞凋亡的作用;并且显示Cks1,2蛋白表达的变化影响Akt、GSK-3β的活性的表达。由于，我们构建的Cks1-/-小鼠出生后就死亡，因此导致Cks1-/-小鼠肝癌模型的建立无法完成。但，我们意外发现Shc1 mRNA表达水平的调控可能会导致心室关闭不全，这一现象目前未见报道。我们成功构建了Cks2基因敲除小鼠，但是DEN诱导的cks2 ko小鼠肝癌的形成与对照组无显著性差异。 .本研究首次在肝细胞癌上揭示Cks1、Cks2蛋白对细胞增殖、凋亡的影响 ； 首次发现Akt、GSK-3β相关的信号通路调节或许是Cks1、Cks2影响细胞增殖、凋亡的途径。以上结果将为肝细胞癌致病机理、临床治疗研究提供新的线索和理论依据，为肝细胞癌基因和单抗治疗寻找新的可能靶点提供实验依据。