小RNA中修饰核苷的分析鉴定及其与糖尿病的相关性研究

修饰核苷与人类的多种疾病具有非常密切的关系。近来研究发现，植物和哺乳动物中的某些小RNA中存在甲基化修饰，但小RNA中其他修饰的研究还非常缺乏。本项目拟采用高效液相色谱、液相质谱串联及纳升级液相质谱串联技术，建立小RNA中修饰核苷的检测体系，研究和发现小RNA中存在的一系列的修饰核苷。在此基础上，利用生物信息学的方法对小RNA中修饰核苷的基本信息进行归纳整理。并研究正常小鼠和糖尿病小鼠肝脏等组织内的小RNA修饰核苷的种类和丰度，探讨修饰核苷丰度变化与糖尿病之间的相关性，希望发现与糖尿病相关的修饰核苷。本项目拟探索小RNA中修饰核苷与及糖尿病的关系，将有助于对小RNA结构和功能的研究，具有较强的创新性。所取得的研究结果将有利于进一步阐明糖尿病的发病机制，为糖尿病的诊治提供新的思路。

利用液相质谱联用技术建立了一种快速分析检测和定量核苷类小分子化合物的方法，利用该分析方法对从正常小鼠和糖尿病小鼠的组织中提取的小RNA的水解产物进行了研究。从正常小鼠肝脏组织中分离得到的5种小RNA中检测到多个修饰核苷，从5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、30-60nt 和10-30nt大小的小RNA中分别发现了11、20、23、22 和22个修饰核苷。我们进一步对丰度高的修饰核苷进行定量发现，假尿嘧啶核苷在所有检测的小RNA中含量最丰富。这表明miRNA、siRNA 和 piRNA等小RNA可能含有更多的修饰核苷。此外，糖尿病小鼠肝脏组织中的有些修饰核苷如Ψ、Um、m6A、i6A和Am的含量与正常小鼠相比存在重要的差异，这为寻找糖尿病早期的诊断Marker提供了重要的理论依据。