脑红蛋白对缺血再灌注损伤螺旋神经节细胞的神经保护作用及机制研究

体外条件下建立螺旋神经节细胞的缺氧损伤模型，采用分子生物学及组织化学技术研究缺氧损伤时螺旋神经节细胞中NGB蛋白的表达调控机制及神经保护机制。通过夹闭供应内耳血液的椎-基底动脉建立耳蜗缺血-再灌注损伤模型，模拟特发性突聋的耳蜗微循环障碍，研究动物模型血清及螺旋神经节细胞NGB蛋白的动态表达特性，结合听力学指标改变分析并评价血清NGB蛋白作为耳蜗损伤生物标记的敏感性及有效性。通过腺病毒介导转染NGB基因，观察其对缺血再灌注耳蜗损伤的阻逆作用，为临床预防和治疗特发性突聋提供新的思路。

摘要 近年研究者发现在神经系统中存在一种特异的携氧蛋白------脑红蛋白，多项研究表明脑红蛋白在缺氧适应性保护过程中起重要作用，可能增加神经细胞的氧供应，提高神经细胞的存活及功能的发挥。为了明确NGB是否对螺旋神经节存在保护作用，我们在体外条件下建立螺旋神经节细胞的缺氧损伤模型，神经丝蛋白免疫组化鉴定螺旋神经节细胞，倒置相差显微镜观察细胞的生长状态，在转录水平及蛋白水平检测了NGB蛋白的表达，我们发现缺氧损伤可以诱导NGB蛋白的表达。随后，利用细菌内同源重组技术构建AdEGFP-NGB腺病毒，采用RT-PCR及Western Blot的方法鉴定，发现构建的病毒滴度高，安全性良好，被感染的细胞NGB mRNA及蛋白高表达。最后，我们建立了缺血再灌注耳蜗损伤动物模型，采用免疫组化及Western Blot，结合ABR波Ⅲ阈值检测，发现缺血后的再灌注损伤比单纯的缺血损伤对耳蜗的危害更严重一些，缺血再灌注损伤可以诱导脑红蛋白的表达。将AdEGFP-NGB腺病毒从圆窗膜途径注入耳蜗，发现AdEGFP-NGB腺病毒在支持细胞、内外毛细胞及螺旋神经节细胞等广泛分布，AdEGFP-NGB可以减轻缺氧再灌注耳蜗损伤。新型携氧球蛋白NGB的研究为耳蜗缺血再灌注损伤的防治提供了新思路，也为临床上治疗突发性耳聋提供了新的方向。