基于大肠主津理论下AQP3在便秘小鼠结肠的作用机制及助阳通便膏方之干预作用

Functional constipation does great harm to people.It reduces the quality of life of patients,， it can also cause or colon cancer and hepatic encephalopathy, and it even can induce acute cardiovascular and cerebrovascular accidents directly life-threatening.. A large number of studies show that the transmembrane transport of water in the colon is mainly achieved through Aquaporin.The task group found that constipation is closely linked to water channel protein in the colon. There are many clinical weakness constipation., herbal ointment in treating, and the curative effect is significant. Observed in experiments, applied after the cream of traditional Chinese medicine, water channel protein in mice suffering from constipation colitis increases,We assume low water channel protein levels of constipation is a mechanism.Paste is by increasing the content of water channel protein in traditional Chinese medicine to treat constipation.To confirm this hypothesis, we copyed of constipation model of mice, started from the gene expression and molecular level, using immunohistochemical method for Chinese traditional medicine extract of constipation model of mice colitis effect of Aquaporin AQP3 Aquaporin and application of RT-PCR for detection of proximal colon 3 (AQP3) mRNA expression levels.This paper will clarify the mechanism of constipation from new vision ,reveal mechanism of herbal paste in treating functional constipation, herbal paste in treating functional constipation provide experimental basis,and provide new ideas for the treatment of functional constipation.

功能性便秘对人们的危害很大，降低了患者的生活质量，还能导致或诱发结肠癌、肝性脑病等疾病，甚至可以诱发急性心脑血管意外而直接危及生命。.大量研究证明结肠中水的跨膜转运主要是通过水通道蛋白实现的，与中医大肠主津理论具有一定的相似性。本课题组发现便秘的产生与结肠中AQP3含量密切相关。临床上便秘以虚秘为多见，采用中药膏方治疗，疗效显著。在预实验中观察到应用中药膏方后便秘小鼠结肠AQP3含量减少，推测AQP3含量增加是产生便秘的一个机制，提出大肠主津理论指导下所组的中药膏方是通过降低AQP3含量来治疗便秘这一假说。因此复制小鼠便秘模型，从基因表达及分子水平入手，采用免疫组化方法研究中药膏方对便秘模型小鼠结肠AQP3含量的影响及应用RT-PCR检测近端结肠水通道蛋白3（AQP3）mRNA表达水平。本课题将从新的视觉阐明便秘发生的机制，揭示中药膏方治疗功能性便秘的作用机制，为中药膏方治疗功能性便秘提

社会在不断进步发展，人们的生活压力也随之增加，加之饮食结构、生活习惯等发生变化，便秘的患病率也不断增加。近年来随着广大学者对便秘的关注程度越来越高，对于功能性便秘的发病机理方面的研究越来越多，也取得了一定的研究进展，但因便秘的复杂性和特殊性，其发病机制至今尚未阐明，仍有较多问题有待于进一步深入研究。因此探索便秘的科学有效治疗，是我们的重要任务。因此我们在大肠主津理论指导下，从改善肠道津液入手，应用膏方增强润肠通便的功效，将原有已取得了令人满意的临床治疗效果的经验方助阳通便汤改革为膏剂助阳通便膏。助阳通便汤是国家中医药管理局第四批、第五批全国名老中医药专家学术经验继承工作指导老师、国家中医药管理局田振国名医工作室专家、首批辽宁中医大师田振国教授经验方，本研究团队前期对助阳通便汤的临床疗效及作用机制进行了研究并发表了相关学术论文。本研究是在助阳通便汤基础上改变剂型为助阳通便膏进行进一步研究。课题组在前期实验研究的基础上，在中医“大肠主津”理论指导下，进一步探讨膏方-助阳通便膏对便秘小鼠排便功能的影响，并分别应用PCR、Wester-blot、免疫组化、免疫荧光双标的方法研究本复方对便秘模型小鼠结肠血管活性肠肽(VIP)、环磷酸腺苷（CAMP）、蛋白激酶（PKA） 和水通道蛋白3（AQP3）及VIP-CAMP-PKA-AQP3通路的影响，结论如下：1.助阳通便膏能明显改善慢传输型便秘小鼠的便秘症状，缩短粪便排出时间，增加排便量。 2.助阳通便膏能增加便秘模型小鼠的肠道动力达到改善便秘的作用。 3.助阳通便膏可使功能性便秘小鼠结肠组织中VIP、CAMP、PKA、AQP3的表达升高，通过调节VIP-CAMP-PKA-AQP3通路，增加肠道水液代谢，进而达到有效治疗慢传输型便秘的作用。4.助阳通便膏对于便秘模型小鼠结肠AQP3蛋白的相对表达水平以及AQP3-VIP和CAMP-PKA免疫荧光双标表达水平的升高作用明显优于助阳通便汤。项目从津液代谢角度探讨膏方治疗便秘的疗效和作用机制，在中药汤剂和中成药的基础上丰富中医治疗便秘的手段和方法，同时为中医药治疗慢传输型便秘提供理论依据和实验依据，为临床应用提供参考依据。