橡胶树橡胶合成酶cDNA克隆和表达的研究

本研究采用锚过PCR法克隆了高产品系热研4号橡胶树橡胶合成酶cDNA，全长为1512bp编码区为1269bp，423个氨基酸。3′-非编码区和5′-非编码区分别为192bp和51bp；构建大肠杆菌表达载体并让其表达后制备目的蛋白抗体将其加进橡胶粒子乳浊液，橡胶粒子上的合成酶活性显著降低，初步证明了所克隆cDNA的正确性。构建植物表达载体并转化进拟南芥中Southern、northern检测结果证明目的cDNA已经整合到拟南芥基因组DNA中。但没有发现拟南芥叶片中有预期的橡胶粒子的形成。估计为：虽然转进橡胶合成酶基因后，拟南芥具备了一套完整的生物合成橡胶分子的酶促系统，但缺乏在橡胶树乳管中的生物合成橡胶粒子的那套特殊的组装系统。进一步的鉴定和应用有待于橡胶树转化系统的建立。