抑制乙型肝炎病毒的siRNA诱导I型干扰素表达信号传导机制的研究

前期研究表明，siRNA能诱导I型IFN表达，但机制不清楚。我们拟用HEK293细胞、T98G细胞和乙肝患者血样为材料,首先，将构建表达目的siRNA的载体与靶基因HBV表达载体pEGFP-S共转染HEK293和T98G细胞，转染后36h通过RT-PCR、Northern blot、 ELISA和流式细胞仪等技术,分析抑制HBVS的siRNA诱导I型IFN表达情况；然后克隆HEK293细胞的TLR3基因和T98G细胞的TLR7基因，分别将TLR3和TLR7质粒表达载体转染到T98G和HEK293细胞内，再次转染siRNA的表达载体并检测I型IFN表达量，确认介导该siRNA诱导I型IFN表达的TLR受体。其次，利用siRNA序列重叠和预测RNA空间结构，试图阐明siRNA诱导I型IFN表达的信号传导分子机制，探讨RNAi与IFN天然免疫系统协同作用对病毒作出防御，为研究疫苗积累理论依据。

我们用HEK293细胞、T98G细胞和乙肝患者血样为材料。首先，将构建表达目的siRNA的载体与靶基因HBV表达载体pEGFP-S共转染HEK293和T98G细胞，转染36h后通过采用RT-PCR、Northern blot、 ELISA和流式细胞仪技术，分析抑制HBV S的siRNA诱导I型IFN表达情况；然后克隆HEK293细胞的TLR3基因和T98G细胞的TLR7基因，分别将TLR3和TLR7质粒表达载体转染到T98G和HEK293细胞内，再次转染siRNA的表达载体并检测I型IFN表达，确认介导该siRNA诱导I型IFN表达的TLR受体。其次，利用siRNA序列重叠和预测RNA空间结构，阐明siRNA诱导I型IFN表达的信号传导分子机制，探讨了RNAi与IFN天然免疫系统协同抗HBV作用，为制定防治HBV的策略和研发疫苗奠定了基础。