环状RNAcirc-0000673介导miR-25调控PTEN通路在子宫内膜异位症间质细胞增殖及侵袭中的作用及机制研究

Endometriosis is one of the most common benign gynecologic diseases, and is active for a long period of time in women of childbearing age. PTEN pathway is an important pathway to regulate cell proliferation and invasion. PTEN has been reported to be down-regulated in endometriosis. Evidence including our research work has shown that circular RNAs are differentially expressed in endometriosis. Our previous work confirmed that circ-0000673 expression was significantly lower in the ectopic endometrium than in the eutopic endometrium. circ-0000673 contains miR-25 response elements by ceRNA analysis, while miR-25 is known to negatively regulate the PTEN gene in tumors and promote tumor cell proliferation and invasion. We found that miR-25 is up-regulated in ectopic endometrium in endometriosis. This project is the first to explore the role of circ-0000673 in the regulation of proliferation and invasion of ectopic endometrial stromal cells. FISH, RIP, and luciferase assays were used to study the molecular mechanism of circ-0000673-mediated miR-25 regulation of PTEN pathway, and to preliminarily evaluate the therapeutic effect of circ-0000673 on the proliferation and invasion of endometriosis. The project will provide an experimental basis for exploring the pathogenesis of endometriosis and developing new methods for diagnosis and treatment.

子宫内膜异位症是最常见的良性妇科疾病之一，在育龄期妇女长期处于活跃状态。PTEN通路是调控细胞增殖与侵袭的重要通路，PTEN在子宫内膜异位症表达下调。近年，包括我们研究工作在内的证据显示，环状RNA在子宫内膜异位症差异表达，我们的前期工作证实circ-0000673在异位内膜表达明显低于在位内膜，ceRNA分析提示其含有miR-25应答元件，而miR-25在肿瘤中负调控PTEN基因而促进肿瘤细胞增殖和侵袭。我们发现miR-25在子宫内膜异位症异位内膜表达上调。本项目首次探索circ-0000673调控间质细胞增殖与侵袭的作用，通过FISH、RIP、荧光素酶实验等实验技术明确circ-0000673介导miR-25调控PTEN通路的分子机制，并初步评价circ-0000673对子宫内膜异位症增殖及侵袭的治疗作用，为探索内异症的发病机制及开发新的诊治手段提供实验依据。

子宫内膜异位症是妇科最常见的疾病之一，在育龄期妇女的发病率达10%-15%。由于子宫内膜异位症难以根治，复发率高，且有恶变的风险，迫切需要有针对性的、长期有效的生物治疗手段。因此，研究子宫内膜异位症发生发展的机制，寻找关键的靶点基因和调控分子，是当前临床和基础研究的重要课题。子宫内膜异位症缺乏长期稳定的细胞系，其临床及基础研究相当程度上依赖于系统的临床生物样本库及可靠的研究模型。近年来，人类器官（organoid）培养技术的建立，使研究者能更深入、更真实地研究疾病发病过程并进行药物筛选。同时，测序技术的发展和成熟对具有多样性的疾病研究提供了更加可靠的技术支撑，转录组及非编码小RNA测序将有利于发现一些在组织或体液中高表达、分子稳定、易于检测的早期诊断分子标志物，以及应用于开发临床干预的靶点分子。.为此，本研究旨在探讨子宫内膜异位症的发病机制并建立系统、可靠的研究模型。我们通过qRT-PCR验证circ_0000673在异位内膜的表达明显低于在位内膜的表达，差异具有统计学意义；通过原位杂交观察circ_0000673在上述组织的表达及分布；通过细胞培养、转染、荧光原位杂交、荧光报告系统等实验证实了circ_0000673通过miR-616-3p/PTEN促进内异症细胞增殖和侵袭。同时，我们建立了系统的子宫内膜异位症临床生物样本库，构建了可稳定传代的organoid模型；利用生物样本库，对内异症同一患者配对的异位内膜与在位内膜组织进行小RNA测序，筛选差异表的tRF、miRNA,并建立了调控网络；对内异症同一患者配对的异位内膜与在位内膜组织及organoid进行转录组测序，构建了配对组织和organoid的差异基因表达谱。本研究为系统地深入研究子宫内膜异位症发生发展的机制、寻找早期诊断生物标志物和新的治疗靶点提供了理论依据和实验基础。