云南HIV阳性者感染Mtb的基因多态性分析及其耐药相关性研究

Tuberculosis (TB) remains a major cause of morbidity and mortality worldwide and HIV is fueling the epidemic. The relationship between gene polymorphisms and drug resistant of Mtb in specific host, such as HIV-infection characteristics, is poorly understood. The genotype of Mtb is complex. Gene polymorphisms analysis of Mtb not only lay foundation for modern molecule epidemiologic study and monitoring, but also can study evolution degree and variation tendency of pathogen in molecular level. In this study, we want to isolate and identify Mtb strains through morphous, staining, cultivation, and physio-biochemistry experiment from tuberculosis patients with infected HIV of Yunnan. It's gene polymorphisms analyzed by PFGE and VNTR method and genetype characteristic analyzed by cluster analysis. Proportion method was adopted to detect the susceptibility on four drugs namely isoniazid, rifampicin, ethambutol and streptomycin. According to result of cluster analysis and drug susceptibility we can find the relationship between gene polymorphisms and drug resistant. So we could have a integer delineation and analysis for Mtb with it's distribution, source of infection, disease prevalence, drug resistant and relationship between genotype characteristic and drug resistant in patients co-infected HIV of Yunnan. It would have important significance for AIDS and tuberculosis with it's treatment, prevention and control.

AIDS与TB是相互促进病变进展、恶化,迅速导致患者死亡的伴发病。HIV阳性者感染结核分枝杆菌（Mtb）的基因多态性以及与耐药的相关性尚不清楚。对Mtb进行基因多态性分析是现代分子流行病学研究和监测的基础，并能从分子水平研究病原菌的进化程度和变异趋势。本研究拟对云南地区HIV阳性合并TB的病原体通过形态染色、培养、生理生化试验等进行菌种分离和鉴定，利用PFGE 和VNTR分子指纹法对分离菌株进行基因多态性分析，通过聚类分析法分析HIV阳性者感染Mtb的基因型特征。采用比例法对所分离的Mtb菌株进行异烟肼、利福平、乙胺丁醇和链霉素的药敏试验。根据基因型聚类分析结果和药敏试验结果，寻找分析Mtb基因多态性与耐药的相关性。从而对云南HIV阳性者感染Mtb 的分布情况、传染来源、疾病流行、基因型多态性以及与耐药的相关性进行整体描述和分析，这对AIDS以及TB的治疗、预防和控制都有着重要意义。

AIDS与TB是相互促进病变进展、恶化,迅速导致患者死亡的伴发病。云南 HIV 感染者和 AIDS 病人数全国居首。对云南 HIV/Mtb 双重感染者的 Mtb 进行病原学、基因多态性，基因型与耐药性相关性研究，弄清楚病原学特征，感染的优势基因型，基因型与耐药性之间的相关性，这样可以针对优势基因型的特殊基因靶位进行药物研究，从而有利于制定防治 Mtb 的措施，而且对于AIDS的预防和治疗具有重要意义。 随着分子生物学理论和技术的飞速发展，诸多高度特异的基因分型方法得到研究建立。目前使用最为广泛的是IS6110-RFLP、Spoligotyping 和 VNTR 技术。而脉冲场凝胶电泳(PFGE) 以其重复性好、分辨力强而被誉为细菌分子生物学分型技术“金标准”,在其他细菌的基因分型中广泛使用。本研究对云南Mtb/HIV双重感染者Mtb进行菌株分离培养与鉴定。先用VNTR法对双重感染Mtb菌株进行基因分型和多态性分析，结果显示云南Mtb有着较高的DNA基因多态性，VNTR 法至少将其分为六个基因群，主要流行菌型为Ⅰ型和a群。并确定了10个分辨力较高适合云南Mtb分型的位点。然后再用PFGE对上述菌株进行了基因分型和多态性分析。通过对VNTR和PFGE两种分型结果的比对得出PFGE与VNTR两种不同的分型方法分型的结果大致相同，并且两种不同分型方法的次优势基因群的菌株分布也大致相同，但VNTR法更进一步的将通过PFGE法分型获得的优势基因群A群又更进一步的分为了两个单独的基因群Ⅰ群和Ⅱ群，由此得出VNTR法的分型结果更为精细，而且成本低廉，是云南Mtb/HIV双重感染者Mtb基因分型的首选方法。最后用比例法检测菌株对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素四种药物的敏感性。通过药敏结果和基因分型结果分析得出细菌耐药与基因多态性之间没有相关性的结论。