基于leptin/ STAT3 信号通路研究胃肠安方调控结肠癌血管生成的作用机制

Colorectal cancer is one of the most frequently occurred cancer in the word,In China, due to dietary habits and lifestyle changes, the incidence rate was gradually rising trend, seriously endangering people's health.Obesity is a risk factor for colorectal cancer , the relationship between colorectal cancer and leptin which associated with obesity is one of the focus of research recently.weichang'an formula is a clinical useful prescription established by qiujiaxin for treating digestive tract cancer,evidence proved this fourmula can induce cancer cell ianoikis and inhibit cell proliferation, adhesion, invasion and migration.leptin and STAT3 promote cell proliferation and induces cell invasion ,leptin is a pro-angiogenic factor, play an essential role in tumor metatasis..In this study, through the establishment of the model of orthotopic transplanted cancer of colorectal tumor in BALB/C mice and in vitro cultruing HT-29 cells, using molecular biology methods such as western blot、ELLISA、RT-PCR, we detect related factors such as leptin、leptin-R、STAT3、p-STAT3、VEGF、survivin、c-myc to investigate the effect of weichang'an formula on colorectal cancer angiogenesis and leptin/STAT3 signaling pathway, investigating the effect and mechanism of weichang'an formula on colorectal cancer angiogenesis.

肠癌是全球高发肿瘤之一，在我国，由于饮食习惯和生活方式的改变，其发病率呈逐渐上升趋势，严重危害人们健康。肥胖是结直肠癌发生的危险因子，与肥胖有关的瘦素与结直肠癌的关系是近来的研究热点之一。.胃肠安方为上海中医药大学附属龙华医院邱佳信教授经验方，前期研究显示该方对癌细胞有促进凋亡、抑制增殖和侵袭转移的作用。瘦素（leptin）与STAT3蛋白能够促进肿瘤的增殖、抑制其凋亡，促进肿瘤血管生成的作用，并在肿瘤转移中具有重要作用。.本研究通过建立裸鼠大肠癌原位移植模型及采用体外培养人结肠癌细胞株HT-29，采用western blot、ELLISA、RT-PCR等分子生物学等方法，研究胃肠安方对肠癌血管生成的作用及与肿瘤血管生成、肿瘤细胞增殖凋亡相关的leptin/STAT3信号通路及其下游靶基因蛋白VEGF、survivin、c-myc的作用，探讨胃肠安方抗血管生成的作用机制。

背景：血管生成是实体瘤发生、发展、转移的重要环节，胃肠安方是上海市名中医邱佳信教授根据临床经验和药物筛选而制定中药方剂。本研究旨在探讨胃肠安及其与抗血管生成药物贝伐单抗联合应用对结肠癌的治疗作用及其可能机制。.主要研究内容：体内研究 采用人结肠癌细胞（HCT 116）建立小鼠皮下移植瘤模型。所有荷瘤Balb/c-nu/nu小鼠随机分为对照组、WCAF治疗组、贝伐单抗治疗组和WCAF联合贝伐单抗治疗组。免疫印迹法检测血清瘦素受体、STAT3、p-STAT3、Bcl-2和VEGFR-1水平。采用免疫组织化学方法检测微血管密度（MVD）。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测瘦素、血管内皮生长因子-A（VEGF-A）基因水平。 体外研究：体外培养人结肠癌HT-29细胞，建立空白对照组以及模型组，CCK-8法检测细胞增殖。ELISA试剂盒检测细胞上清液VEGF含量。体外培养HT-29细胞株、加入低、中、高不同浓度胃肠安方与150ng/ml leptin共育24小时，对照组加入STAT3抑制剂AG490,western blot法检测STAT3和P-STAT3水平，BCL-2、cmyc及leptin R表达。.结果：WCAF促进肿瘤细胞凋亡。WCAF可降低肿瘤组织中瘦素和VEGF-A基因的表达。WCAF治疗后肿瘤组织中CD31、Leptin-R、VEGFR-1、STAT3和p-STAT3蛋白表达下调。此外，贝伐单抗联合WCAF具有协同作用。胃肠安方能够剂量依赖性的抑制leptin诱导的HT-29细胞增殖。胃肠安方能够抑制leptin诱导的HT-29细胞分泌VEGF，并呈剂量依赖性。胃肠安方能够抑制leptin诱导的STAT3磷酸化、VEGFR1蛋白、survivn蛋白表达及cmyc和bcl-2基因表达。.意义:WCAF对人结肠癌HCT-116裸鼠皮下移植瘤的生长、凋亡、血管生成均有抑制作用,WCAF联合贝伐单抗有协同作用,其机制可能与Leptin/STAT3信号转导及VEGFR表达有关，胃肠安方能抑制瘦素刺激的结肠癌细胞增殖及VEGF分泌，可能是其抗肿瘤的作用机制之一。本研究可为中医药与抗血管生成治疗结肠癌的临床联合应用提供实验依据。