肿瘤相关抗原－线粒体蛋白12的功能机制和临床应用前景评估

肿瘤相关抗原-线粒体蛋白12(TAMP12)是本实验室应用SEREX技术从人卵巢癌cDNA文库筛选获得的一个新分子，蛋白分子量约12KD，亚细胞定位于线粒体。前期研究显示该基因在某些肿瘤细胞和组织中高表达；过表达该蛋白能促进肿瘤细胞生长、抑制细胞凋亡，对抗癌药物5-FU具有抵抗作用；并发现了一些可能与TAMP12相关基因或蛋白。本研究将进一步弄清TAMP12在细胞增殖、凋亡以及线粒体相关生物学过程中的功能；运用免疫共沉淀结合质谱分析的方法，寻找TAMP12的相互作用蛋白并加以验证，探讨TAMP12蛋白的作用机制。同时，运用已建立的ELISA、Real-Time PCR和免疫组化方法，进一步大样本分析血清TAMP12抗体含量，TAMP12 mRNA和蛋白表达与肿瘤类型、分级、预后的相关性，确定TAMP12作为肿瘤生物标记的应用价值，有可能为临床肿瘤的诊治或预后评估开辟新途径。

肿瘤相关抗原12(TAMP12)是本实验室应用SEREX技术从人卵巢癌cDNA文库筛选获得的一个新基因。在实验室前期工作基础上着重探讨了TAMP12的功能和作用机制以及临床初步的应用价值。首先，通过密度梯度超速离心法获得高纯度的线粒体，Western blot检测，发现TAMP12主要定位于细胞浆，而非线粒体，应用免疫荧光技术，通过共聚焦显微镜证实了上述结果。其次构建TAMP12稳定高表达及干扰的肿瘤细胞株，通过一系列体内体外实验证实TAMP12能够促进肿瘤细胞增殖。同时，我们发现TAMP12能够拮抗抗肿瘤药物5-FU诱导的S期DNA合成作用，与抑制Caspase3、8、9活性有关。运用基因芯片和蛋白组学方法（二维电泳、质谱分析），发现了一些可能与TAMP12作用相关的基因和蛋白。另外，收集200多例正常人和肿瘤患者的血清及近60例肿瘤组织样本，通过制备新的TAMP12原核表达蛋白和多株单克隆抗体，应用ELISA、免疫组化等方法检测TAMP12的表达水平，分析与肿瘤类型、分级和预后的相关性，初步结果显示具有临床应用前景，从而为进一步确证TAMP12作为肿瘤标记物在肿瘤诊断、治疗中的重大应用价值奠定了坚实的基础。