HCV慢性感染者和病毒自发清除者外周血单核细胞介导的固有免疫应答特征研究

Development of HCV infection is typically followed by chronic hepatitis C in most patients, while spontaneous HCV viral clearance occurs in only a minority of subjects. It is demonstrated that status of host innate immunity in early stage of HCV infection is closely associated with clinical outcome. Although functional impairments of some innate immune cells, such as NK cells and dentritic cells were identified in HCV long-term persistence, the status of innate immunity in spontaneous HCV recovered subjects was rarely investigated, especially of monocyte which is characterized by secretion of IL-10, TNF-α and other cytokines. Based on the unique nature of innate immunity in HCV recovered subjects, this study will focuse on characteristics of monocytes and diferences of immune response mediated by monocyte and its subsets in HCV chronic infected patients and HCV spontaneous recovered individuals. Comprehensive analysis of immune response mediated by monocyte and its subsets upon TLR ligands and interferon stimulation, the effects of monocyte-mediated T cell proliferation, and PD1/PDL-1 negative regulatory signals involved in monocyte activation will be studied in this proposal. This study will explore the functional characteristics and potential mechanisms of monocyte-mediated immunity in HCV infected patients and look for novel targets based on monocyte associated immune control strategy.

HCV急性感染后除少数个体发生病毒自发清除外，多数进展为慢性感染。感染早期宿主体内固有免疫应答能力强弱与临床转归密切关联。HCV慢性感染状态下多种固有免疫应答细胞如NK细胞、树突状细胞等均报道有一定程度的功能损伤，而对自发清除者体内固有免疫状态研究较少，尤其是对分泌IL-10、TNF-α等为特征的单核细胞功能缺乏深入探讨。本项目基于HCV自发清除者宿主固有免疫状态的独特性，聚焦于固有免疫应答主要效应细胞群之一的单核细胞，比较研究外周血单核细胞及其亚群在HCV慢性感染和自发清除者中免疫功能的变化规律和差异性，特别对单核细胞各亚群对TLR配体和干扰素（IFN）的反应特征、刺激T细胞增殖能力和PD1/PDL-1负调控信号参与单核细胞活化的作用机制等进行综合分析，旨在挖掘在HCV病毒自发清除者外周血单核细胞免疫效应的功能特点和潜在机制，为探索单核细胞相关的免疫控制新策略寻找靶点。

本课题针对HCV急性感染后自限清除者外周血单核细胞介导的固有免疫应答特征和潜在机制进行了系统的研究，我们分析比较了HCV慢性感染者、HCV自发清除者以及健康对照三组人群的单核细胞三个亚群（CD14++CD16-、CD14++CD16+、CD14+/dimCD16+）的分布和表型特征及其与HCV病毒载量和疾病进展之间的关联性。研究显示，与其他组相比，CD14++CD16+单核细胞在总单核细胞中所占的比例在HCV慢性感染者中显著降低，并与HCV RNA和核心抗原呈负相关。此外，与CD14+/dimCD16+单核细胞相比，CD14++CD16+单核细胞表达较高的表面共刺激分子以及低水平的抑制性分子。在三组人群中，PD-1表达水平和PD-L1/CD86比值在HCV慢性感染者中显著升高，而在HCV自发清除者中显著降低，且在HCV慢性感染者中，PD-L1/CD86比值与HCV RNA和核心抗原呈正相关。刺激试验显示，TLR配体以及HCV JFH-1刺激会显著升高PD-L1/CD86比值以及细胞因子水平。本研究显示CD14++CD16+单核细胞在HCV感染中的免疫反应调节中发挥了重要的作用并提示CD14++CD16+单核细胞的PD-L1/CD86比值可作为一个指标来评估CD14++CD16+单核细胞的免疫状态以及HCV感染的疾病转归。.此外，基本我们已建立的HCV感染队列，在HCV研究中取得了有关成果包括：1）HIV合并感染加快了HCV自发清除者体内HCV抗体衰减速度，单纯HCV感染后自发清除者需要约20年左右时间才能HCV抗体转阴，而合并HIV感染后，该时间缩短为16年左右。该结果提示HCV感染特别是合并HIV感染的情况下，HCV感染率可能被低估。2）HCV抗体S/CO比值可作为HCV抗体高值和低值的分界值。在未治疗的人群中，排除免疫损伤性疾病的可能性，低值HCV抗体水平出现在很大程度上可判断为HCV自发清除者。3）对HCV慢性感染者中，HCV核心抗原和HCV RNA存在类似的动态变化模式。在合并感染者中，核心抗原/病毒载量的比值与宿主的免疫状态密切相关。4）对HCV/HIV合并感染会加重慢性HCV感染引起的铁蓄积而加重肝纤维化的发生发展。 5）HIV感染者具有高水平的氧化应激（tGSH、MDA等）状态。HIV合并感染可通过加重慢性HCV感染者的氧化应激状态升高而加重肝纤维化。