补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3抑制唾液腺纤维化的作用及机制研究

Salivary gland fibrosis is an important pathological process in chronic inflammatory diseases of salivary glands, and it is also a key reason for salivary gland dysfunction and enlargement of glands. Our preliminary work shows that CTRP3 significantly decreased in histological and serological levels of IgG4-related sialadenitis, however, the effect of CTRP3 on salivary gland fibrosis has not been reported. By using Real-time PCR, immunoblotting and immunofluorescence, we will observe the effect of CTRP3 on epithelial mesenchymal transition (EMT) and myofibroblast transformation in TGF-β-induced CTRP3 knockout mice, will elucidate that CTRP3 inhibits fibrosis by suppressing EMT in TGF-β-induced salivary gland cells, and will investigate the effect of CTRP3 on TGF-β-induced myofibroblast transformation in salivary fibroblast cells. By using chemical drugs and gene transfection methods, we will explore the vital role of GSK-3β in salivary gland fibrosis and will elucidate that GSK-3β is the key target of CTRP3. This study will clarify the key role and mechanism of CTRP3 in salivary gland fibrosis and provide new insight into the therapeutic strategy of salivary gland fibrosis by using CTRP3 and targeting its downstream GSK-3β.

唾液腺纤维化是唾液腺慢性炎性疾病的重要病理过程，也是唾液腺功能障碍的关键原因，我们前期工作显示，在唾液腺炎性纤维化的代表疾病IgG4相关性唾液腺炎中，补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3（CTRP3）在组织和血清学水平均显著降低，而 CTRP3对唾液腺纤维化的影响尚无报道。本项目拟使用Real-time PCR、免疫印迹和免疫荧光等方法，在TGF-β诱导的CTRP3敲除小鼠，观察CTRP3对上皮间充质转化（EMT）和肌成纤维细胞转化的影响；在TGF-β诱导下颌下腺腺泡细胞发生EMT的模型中，明确CTRP3通过抑制唾液腺EMT从而抑制纤维化；在TGF-β诱导下颌下腺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的模型中，明确CTRP3通过抑制肌成纤维细胞转化进而抑制纤维化。采用工具药和基因转染等方法，明确GSK-3β在唾液腺纤维化中的重要作用，揭示GSK-3β是CTRP3发挥抑制唾液腺纤维化作用的关键靶点。

唾液腺纤维化是唾液腺慢性炎性疾病的重要病理过程，也是唾液腺功能障碍的关键原因，我们前期工作显示，在唾液腺炎性纤维化的代表疾病IgG4相关性唾液腺炎中，补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3（CTRP3）在组织和血清学水平均显著降低，而 CTRP3对唾液腺.纤维化的影响尚无报道。本研究在体外水平培养唾液腺腺泡细胞，使用TGF-β诱导细胞发生上皮间充质转化（EMT），EMT.是上皮细胞向成纤维细胞转化的关键，是唾液腺纤维化的重要环节，蛋白免疫印迹的结果显示，TGF-β引起上皮标志蛋白E-cadherin以及Claudin-3表达降低，而间充质标志蛋白Vimentin表达升高，使用CTRP3预先处理的细胞，可以减弱由TGF-β带来的促进EMT现象。体外水平培养唾液腺的成纤维细胞，TGF-β诱导其向肌成纤维细胞转化，α-SMA表达升高，从而分泌更多的纤维胶原成分，而CTRP3可以减弱由TGF-β带来的肌成纤维细胞转化。研究证实，TGF-β可以激活唾液腺上皮细胞及成纤维细胞的GSK-3β活性，使用抑制剂抑制GSK-3β激活后，可以显著抑制TGF-β介导的EMT和肌成纤维细胞转化，说明TGF-β经由GSK-3β途径引起唾液腺上皮细胞EMT及唾液腺成纤维细胞肌成纤维细胞转化。免疫印迹的结果显示给予CTRP3可以显著抑制由TGF-β引起的GSK-3β激活，因而CTRP3通过抑制TGF-β介导的GSK-3β激活，从而发挥抑制唾液腺纤维化的作用。并且，对IgG4相关性唾液腺炎患者的唾液腺样本及血清学研究显示，CTRP3的组织学及血清学较正常人均显著降低。 该研究结果进一步提示，未来，补充CTRP3可能是针对IgG4相关性唾液腺炎等疾病唾液腺纤维化的有效治疗方法。