表达LTB-F乳酸乳球菌抗呼吸道合胞病毒的免疫保护机制研究

呼吸道合胞病毒(RSV)是严重危害人类健康的病原体，目前尚无有效疫苗。申请者及他人的实验证明，粘膜佐剂LTB同抗原融合，能够增强、调控抗原诱导粘膜免疫应答，尤其是产生特异性sIgA。乳酸乳球菌是安全有效的疫苗活载体，通过口服重组乳酸乳球菌呈递抗原可诱导包括呼吸道在内的粘膜免疫应答。本项目选择RSV保护性抗原F蛋白基因，将LTB与F的基因融合，构建表达LTB-F融合蛋白的重组乳酸乳球菌，口服免疫Balb/c小鼠，用RSV活病毒进行攻毒，检测攻毒前后血液、呼吸道组织和灌洗液的中和抗体、CTL、细胞因子，观察攻毒后小鼠肺组织切片的改变，评价疫苗诱导的体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫应答，进而阐明候选疫苗可能的保护性机制，本项目的完成将为研制新型安全、有效的RSV疫苗奠定理论基础。

呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）是引起婴幼儿下呼吸道感染的最重要病原体，本项目选择RSV主要保护性抗原F蛋白部分片段F212-489，将大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位（LTB）与F212-489基因融合，构建表达LTB-F212-489融合蛋白的重组乳酸乳球菌，口服免疫Balb/c小鼠，检测小鼠血液、呼吸道组织和灌洗液的相关抗体、CTL、脾脏细胞因子生成细胞，用RSV活病毒对免疫后小鼠进行攻毒，检测病毒滴度和小鼠肺组织切片的改变。实验结果表明，该重组乳酸乳球菌能够刺激小鼠产生针对RSV的具有中和作用的特异性sIgA及IgG抗体，免疫后的脾脏淋巴细胞具有特异性的CTL效应，所诱导的免疫应答能避免Th2免疫极化。攻毒实验表明，表达LTB-F212-489的重组乳酸乳球菌免疫后能有效降低RSV感染滴度，并减少肺部的病理损伤。因此，该重组乳酸乳球菌候选疫苗能有效诱导小鼠保护性的细胞免疫及体液免疫，且具有较好的安全性及有效性，为进一步研制新型安全、有效的RSV疫苗奠定了基础。