湖北麦冬均一多糖由PPARγ信号通路介导的降血脂作用及其机制的研究

This study was to investigate anti-hyperlipidemic effect and its mechanism of polysaccharides from the tuberous root of Liriope spicata (Thunb.) var. prolifera activity of LSP1 and LSP2（LSP1：Liriope spicata polysaccharides 1 and LSP2：Liriope spicata polysaccharides 2）on the Zucker rat, 3T3-L1 adipocyte. We also evaluate the effect of TLSP, LSP1 and LSP2 on hyperlipidemic patient. The level of FFA, Leptinof adipocytes are estimated by kit , respectively. The Zucker rat are received daily oral administration of the LSP1 and LSP2 for 28 days after hyperlipidemia animal model is established. TC, TG, HDL, LDL and VLDL are performed to evaluate the anti-hyperlipidemic activity of polysaccharides. In addition, Oil-red O staining analysis of liver, kidney,white and brown adipose are performed to observe the pathological process of each group. To evaluate the mechanism of lipid-lowering activity of the polysaccharides , the proteinand and mRNA expressions of PPARγ/CD36/oxLDL/ABCA1/ABCAG 以及PPARγ/AFABP/ACS/FATP/LPL/ApoA,B,C,E in liver tissue or mcrophagesare of animal model are estmited by the immunohistochemistry,immunofluorescence, western blotting and Realtime-PCR after 28 days of LSP1- and LSP2-administration.

本项目主要对两种湖北麦冬均一多糖单体LSP1和LSP2的降脂疗效及其作用机制进行研究。从整体上探讨LSP1和LSP2对脂质代谢的影响。体外3T3-L1细胞实验使用蛋白试剂盒，检测LSP1和LSP2对脂肪细胞中游离脂肪酸FFA等脂质代谢相关因子的活性。体内实验中，将高血脂动物（SD、Zucker大鼠）随机分为高血脂对照组、阳性组、正常组、LSP1、LSP2（高、低剂量组）。28天后测定各组给药前后的血清胆固醇相关指标。取各组动物肝、肾、中动脉血管组织等，病理染色，以观察其病理形态。使用免疫组织化学、蛋白印迹电泳法Western Blot和Realtime-PCR 等方法检测湖北麦冬均一多糖对PPARγ/CD36/oxLDL/ABCA1/ABCAG以及PPARγ/AFABP/ACS/FATP/LPL/ApoA,B,C,E两条信号通路的蛋白表达的影响，从分子水平上探讨其改变机体胆固醇代谢的机制。

湖北麦冬均一多糖单体LSP1和LSP2是从道地药材山麦冬中提取，分离纯化后纯化得到的两种低分子果糖。本研究从LSP1和LSP2降低胆固醇和改善机体脂代谢的层面研究其治疗高脂饮食诱导的高脂血症肥胖C57BL6J小鼠的分子机制。.1.LSP1，LSP2对高脂饮食诱导的高脂血症小鼠模型的治疗作用。结果提示，LSP1，LSP2可有效控制高脂饮食诱导的肥胖小鼠体重增长；并能显著下调高脂饮食造成的高血清胆固醇水平，促进机体脂质代谢，并呈现一定的量效关系；提升高脂饮食诱导小鼠模型的护肝和抗氧化能力；.2.LSP1,LSP2促进胆固醇代谢和脂质代谢的相关机制研究，本研究通过组织形态学，Realtime-PCR等分子生物学手段，检测LSP1,LSP2对胆固醇代谢和脂质代谢相关信号通路的影响。结果提示湖北麦冬多糖可显著上调胆固醇代谢通路LXRα/CYP7A1/ApoE/HMGCR/LDL-R mRNA的活性，抑制和下调LXRβ/SHP/CYP51的mRNA表达水平，从分子水平解释其改变机体胆固醇代谢的机制。其次，LSP1,LSP2通过抑制下调PPARγ2mRNA的表达水平, 抑制C/EBPα/SREBP1-c/LPL/Ap2/Fas/FXR的活性，并增加PPARα的表达水平；此外LSP1,LSP2通过降低小肠组织炎性因子TNF-α的表达，缓解机体炎症。.综上，湖北麦冬多糖能够从多个层面改善饮食诱导高脂血症小鼠的脂质代谢，促进胆固醇代谢，从一定程度上改善脂代谢紊乱，并促进靶器官恢复正常功能，延缓疾病的发展。达到改善高脂血症的临床疗效。