两个lncRNA作为瘢痕疙瘩的疾病分子标志物和治疗靶点研究

Long non-coding RNA (lncRNA) plays a key role in various disorders. However, its role in keloid is still unclear. We explored differentially expressed (DE) lncRNAs between keloid tissue (KT) s and normal tissue (NT) s and found that many lncRNAs were regulated in keloid. Among them, two lncRNAs (ENST00000439703 and uc003jox.1) were still highly expressed in the cell samples and were validated by expanded tissue samples. To verify whether these lncRNA can be used as a biomarker of keloid and understand possible mechanisms of action, the biological significance of lncRNA and the association with PI3K/AKT pathway are firstly analyzed with the sample of the keloid patients. Then, we construct the lncRNA co-expression network to predict the possible target gene of lncRNA in the PI3K / AKT pathway. Finally, we detect changes of PI3K/Akt pathway, cell proliferation, apoptosis, migration and invasive of keloid fibroblasts and normal fibroblasts after silencing or overexpression of these lncRNA.

长链非编码RNA(lncRNA)在多种疾病中发挥重要作用，然而在瘢痕疙瘩发病机制中作用尚不明确。前期工作中我们利用lncRNA芯片，在瘢痕疙瘩组织和正常组织中筛选出多个差异表达的lncRNA，其中两种lncRNA（ENST00000439703和uc003jox.1）在细胞样本中仍然高表达，并得到扩大组织样本的验证。为验证目的lncRNA是否可作为瘢痕疙瘩的分子标志物，以及可能的作用机制，本课题首先利用目前有效的治疗方式对瘢痕疙瘩患者进行随访并分层，留取组织和外周血样本，对目的lncRNA在瘢痕疙瘩患者中的生物学标志意义和与PI3K/AKT通路的关联性进行分析。其次，构建lncRNA共表达网络，预测目的lncRNA在PI3K/AKT通路的靶基因；并在瘢痕疙瘩成纤维细胞和正常成纤维细胞中沉默或过表达目的lncRNA，检测 PI3K/Akt通路及细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭性的变化。

长链非编码RNA(lncRNA)在多种疾病中发挥重要作用，然而在瘢痕疙瘩发病机制中作用尚不明确。前期工作中我们利用lncRNA芯片，在瘢痕疙瘩组织和正常组织中筛选出多个差异表达的lncRNA，其中两种lncRNA（ENST00000439703和uc003jox.1）在细胞样本中仍然高表达，并得到扩大组织样本的验证。本研究旨在通过在瘢痕疙瘩成纤维细胞（KF）中构建目的lncRNA（ENST00000439703和uc003jox.1）沉默或过表达模型；研究沉默或过表达目的lncRNA对KF中细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭性的影响以及对PI3K/Akt通路、目的lncRNA靶基因的作用，从而探讨目的lncRNA（ENST00000439703和uc003jox.1）在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的作用效应及可能作用机制，以进一步阐明瘢痕疙瘩发病的可能作用机制，为治疗瘢痕疙瘩提供新的治疗靶点。研究结果表明：1、我们成功构建了ENST00000439703和uc003jox.1的敲降及过表达KF细胞模型；2、MTT实验、克隆形成实验、Transwell侵袭实验、细胞凋亡结果表明敲低ENST00000439703或uc003jox.1后均能显著抑制KF细胞增殖、侵袭及促进KF细胞凋亡；而过表达ENST00000439703或uc003jox.1均可以促进KF细胞增殖、侵袭及减少细胞凋亡；3、实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹检显示，敲降ENST00000439703 或者uc003jox.1后，KF细胞中PI3K、AKT、mTOR表达量无明显差异，磷酸化水平明显降低，PTEN表达升高。而过表达ENST00000439703或uc003jox.1后，PI3K、AKT、mTOR蛋白水平无明显改变，磷酸化水平明显升高，PTEN表达下降。结论：ENST00000439703和uc003jox.1均能促进KF细胞的增殖、侵袭，抑制KF细胞的凋亡，作用可能与这两种lncRNA抑制PTEN表达，促进PI3K、AKT及mTOR磷酸化表达有关。